マウス肝ミトコンドリアのATPaseインヒビターとその安定化因子の精製

小鼠肝线粒体ATP酶抑制剂的纯化及其稳定因子

• 批准号: 05780462
• 负责人: 市川 直樹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780462/
• 关键词: FoF_1-ATPase; ATPaseインヒビター; ATP合成酵素

ミトコンドリアのF_1Fo-ATPaseはATPaseインヒビター蛋白とその安定化因子(15K蛋白、9K蛋白)によって活性調節がなされている。ATPaseインヒビターは従来、酵母や牛心筋で研究されてきたが、本研究では最近Gene Targettingなどの遺伝子操作法が確立されつつあるマウスのATPaseインヒビターと安定化因子の精製および構造決定を目的とした。実験に先立ち、まず同じげっ歯類に属するラットの肝からのATPaseインヒビターの精製を試みたが100頭余りのラットからわずかのATPaseインヒビターしか単離されなかった。時を同じくしてアメリカのRouslinら(1993)はラット、マウスを含むげっ歯類にはATPaseインヒビターは非常にわずかしか存在しないとの報告を行った。しかし、Higuchiら(1992)、Pedersenら(1993)は牛のインヒビターのcDNAをプローブとして、ラット肝のインヒビターのcDNAをクローン化した。げっ歯類におけるATPaseインヒビターの作用についてはまだ問題があると思われたので、ラットのATPaseインヒビターのcDNAの微生物での発現およびそのCharactrizationを試みることにした。cDNAはHiguchiらが決定した塩基配列に基づき、ラット肝cDNAライブラリーからPCRによって単離した。pUC119にサブクローニングしたcDNAの塩基配列はHiguchiらのものと完全に一致した。このcDNAを酵母の発現ベクターであるYEp51のGAL10プロモーターの下流にクローニングした後、酵母のATPaseインヒビター欠損株であるD100株へ導入した。しかしこの菌体から熱抽出した蛋白質画分からATPaseインヒビターの活性を検出する事はできなかった。今後酵母の発現系での発現条件の再検討、また大腸菌での発現系の検討を行いたい。

ミ ト コ ン ド リ ア の F_1Fo - ATPase は ATPase イ ン ヒ ビ タ ー protein と そ の stabilization factor (15 k protein, 9 k protein) に よ っ て activity regulating が な さ れ て い る. ATPase イ ン ヒ ビ タ ー は 従 research さ, yeast や cow heart muscle で れ て き た が, this study で は recently Gene Targetting な ど の posthumous son 伝 operation が establish さ れ つ つ あ る マ ウ ス の ATPase イ ン ヒ ビ タ ー と stabilization factor の refined お よ purpose decision を び structure と し た. Be 験 に ち, first ま ず with じ げ っ に 歯 found す る ラ ッ ト の liver か ら の ATPase イ ン ヒ ビ タ ー の refined を try み た が more than 100 head り の ラ ッ ト か ら わ ず か の ATPase イ ン ヒ ビ タ ー し か 単 from さ れ な か っ た. When を with じ く し て ア メ リ カ の Rouslin ら (1993) は ラ ッ ト, マ ウ ス を containing む げ っ 歯 class に は ATPase イ ン ヒ ビ タ ー は very に わ ず か し か exist し な い と の report line を っ た. し か し, Higuchi ら (1992), Pedersen ら (1993) は cattle の イ ン ヒ ビ タ ー の cDNA を プ ロ ー ブ と し て, ラ ッ ト liver の イ ン ヒ ビ タ ー の cDNA を ク ロ ー ン change し た. げ っ 歯 class に お け る ATPase イ ン ヒ ビ タ ー の role に つ い て は ま だ problem が あ る と think わ れ た の で, ラ ッ ト の ATPase イ ン ヒ ビ タ ー の cDNA の microbial で の 発 now お よ び そ の Charactrization を try み る こ と に し た. CDNA は Higuchi ら が decided し た salt base with column に base づ き, ラ ッ ト liver cDNA ラ イ ブ ラ リ ー か ら PCR に よ っ て 単 from し た. PUC119 に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し た cDNA の salt base with column は Higuchi ら の も の と に completely consistent し た. こ の cDNA を yeast の 発 now ベ ク タ ー で あ る YEp51 の GAL10 プ ロ モ ー タ ー の obscene に ク ロ ー ニ ン グ し た, yeast after の ATPase イ ン ヒ ビ タ ー owe damage strain で あ る D100 strains へ import し た. し か し こ の bacteria か ら hot spare し た protein draw points か ら ATPase イ ン ヒ ビ タ ー の active を 検 out す る matter は で き な か っ た. In the future, the occurrence of yeast will be based on the conditions for the occurrence of で and 検, and the occurrence of また escherichia coli で will be based on 検 and を た.

项目成果

Haruo Mimura et.al.: "Binding of an Intrimsic ATPase Inhibitor to the Interface between alpha-andbeta-Subumits of F_1Fo-ATPase upon De-Energization of Mitochondria" Journal of Biochemistry. 113. 350-354 (1993)

Haruo Mimura 等人：“线粒体失能后，内在 ATP 酶抑制剂与 F_1Fo-ATP 酶的 α-和 β-亚基之间的界面的结合”《生物化学杂志》。