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脊髄一次求心性線維投射路形成の分子機構についての培養法を用いた解析

培养法分析脊髓初级传入纤维投射束形成的分子机制

基本信息

批准号：
05780559
负责人：
志賀隆
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yamagata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

脊髄一次求心性軸索の投射路形成における細胞接着分子の役割を明らかにするための実験系として凍結培養法(cryoculture)を確立し、この系を用いて投射路形成におけるNeuron-gila cell adhesion molecule (Ng-CAM)の役割を調べた。材料としては一次求心性軸索が専ら白質を走行する孵卵5日と、この軸索が白質から灰白質に侵入する孵卵9日のニワトリ胚を用いた。ニワトリ胚から脊髄を取り出して凍結切片を作成し、予めpoly-L-lysineをコートしておいたカバースリップ上に貼付けた。次に、トリプシン処理により単離した脊髄神経節細胞を、凍結切片を貼付けたカバースリップ上で分離培養した。1-3日後にパラフォルムアルデヒドで固定し、神経細胞に特異的なbeta-tubulinに対する抗体を用いて脊髄神経節細胞とそこから伸び出す神経突起を染めだして、この突起の走行を調べた。孵卵5日の脊髄凍結切片周辺に存在する神経節細胞から脊髄切片にむかって伸びる神経突起のほとんどは脊髄白質を走行した。それに対し、孵卵9日の脊髄切片上では約半数の神経突起が白質から灰白質に侵入した。これらの走行は生体における一次求心性軸索の走行に類似していた。培地にNg-CAMに対する機能阻害抗体を加えると、孵卵5日の脊髄白質から灰白質へ侵入する神経突起の割合が増加した。しかし、抗Neuron cell adhesion molecule (NCAM)抗体を加えた場合にはこのような増加は見られなかった。生体内でのNg-CAMの分布を考えると、孵卵5日で一次求心性軸索が脊髄白質を走行して灰白質には侵入しない現象に、この時期の白質に多く存在するNg-CAMが関与することが示唆された。

The cell adhesion molecule (Ng-CAM) was used to modulate the cell adhesion molecule (Ng-CAM) pathway formation by freezing culture. The first time the central axis runs straight, the second time the central axis runs straight, the third time the central axis runs straight, the fourth time, the fourth time the central axis runs straight, the fourth time the central axis runs straight. The first step is to create a frozen section and paste it on the surface. In addition, the culture medium was used to isolate and culture the cultured neurons. 1-3 In the future, the antibody against the fixed and neurocyte-specific beta-tubulin will be used to modulate the staining and movement of the neuroprocesses in the spinal ganglion cells. 5 days after hatching, the ridge frozen section is surrounded by ganglion cells, the ridge section is extended, and the ridge is straight On the 9 th day of incubation, about half of the nervous system protrusions were straight and gray. The movement of the central axis is similar to that of the living body. Ng-CAM is a functional barrier antibody that increases in the 5-day incubation period. Anti-Neuron Cell Adhesion Molecule (NCAM) Antibody The distribution of Ng-CAM in the organism was studied. The central axis was calculated once after 5 days of incubation. The straight line of the ridge traveled. The straight line was invaded. The straight line existed in the period. The Ng-CAM was related to the egg.