細胞性粘菌のレクチンdiscoidin Iの細胞接着レセプターの解析

盘基网柄菌凝集素盘基蛋白I细胞粘附受体的分析

• 批准号: 05740474
• 负责人: 福沢 雅志
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05740474/
• 关键词: discoidin; レクチン; RGD配列; 細胞外マトリクス

細胞性粘菌における細胞-基質間の接着は、RGD配列を含むレクチンであるdiscoidin Iが細胞外マトリクス分子として働き、細胞表面に存在するECMレセプターである糖タンパク質gp67と相互作用することによっておこると考えられている(Gabius et al.,Cell 42,449-456,1985)。本研究は昨年度の実験に引き続き、gp67の単離・精製を行った。粘菌の膜画分をNP40で可溶化し、5mlのdiscoidin Iアフィニティカラムにかけた。1.5M NaClで溶出すると分子量67kd付近には3本のバンド(gp67a,67b,67c)がみられ、他に100kd,60kd,47kdのタンパク質が同時に溶出されてきた。100kd,60kdのタンパク質はGabiusらの報告と一致していたのでdiscoidin Iと相互作用するタンパク質であるとおもわれるが、彼らはnonspecificなものとしている。47kdは精製バッチ間で差がなく溶出されてくるがヒートショックタンパク質である可能性もある。67kd付近の3本のバンドがRGD配列特異的に相互作用するタンパク質であるか同定するために6残基の合成ペプチドGRGDHDを作製し、ペプチド溶出を試みた。塩溶出を行ったときと同様にカラムに膜抽出物を反応させ、0.5M NaClで十分洗った後0.45M NaClにとかした2.5mMペプチドで溶出した。溶出液を濃縮し電気泳動したところ、分子量のいちばん大きいgp67aが溶出されており、他のタンパク質はほとんど見られなかった。しかしgp67aの溶出量は塩溶出のときと比べ非常に少なく、銀染色で同定できる程度であった。精製したgp67a標品をアミノ酸配列分析にかけたが、量的な問題と他のペプチドのコンタミネーションにより、核酸プローブを合成するに足る情報を得ることが出来なかった。現在cDNAライブラリーをスクリーニングするため、gp67a,b,cの混合物をマウスに免疫しモノクローナル抗体を調製している。

The cellular myxomycetes were isolated from the cell to the substrate, and the RGD was arranged with discoidin I containing the extracellular protein. The cell surface was characterized by the presence of ECM, glucose, gp67 interaction and DNA sequencing (Gabius et al.,Cell 42449-456, 1985). The purpose of this study is to introduce the introduction and gp67 information in the past year. Slime mold: NP40, soluble, 5ml, discoidin I, soluble, soluble. The molecular weight 67kd of 1.5m NaCl was digested at the same time. The molecular weight of 67kd was paid nearly 3 times as much as 100kd, 60kd and 47kd respectively. 100kd, 50kd, 50kd, 50kd, 10kd, 50kd, 10kd, 10kd, 50kd, 10kd, 50kd, 100kd, 50kd, 50kd, 100kd, 50kd, 60kd, 60kd, 100kd, 60kd, 60kd, 100kd, 60kd, 60kd, 60kd, 100kd, 50kd, 60kd, 100kd, 50kd, 60kd, 100kd, 50kd, 60kd, 50kd, 60kd, 60kd, 50kd, 60kd, 60kd, 60kd, 50kd, 60kd, 100kd, 50kd, 60kd, 60kd, 100kd, 60kd, 60kd, 100kd, 60kd, 60kd, 47kd is very sensitive to the possibility that it is not possible to dissolve it. 67kd paid nearly 3 times for the interaction of the RGD ligand, which was linked to the synthesis of the 6 residues and the dissolution of the GRGDHD. After the membrane extract was washed with 0.5m NaCl for 10 min, 0.45m NaCl solution was added to 2.5mM solution. The leachate was determined by electrophoretic electrophoresis and molecular weight determination. The molecular weight of gp67a was determined by electrophoretography. The amount of gp67a dissolution was much less than that of dye, and the degree of staining was the same. Precision gp67a labeling, acid collocation analysis, quantity analysis, other problems, nucleic acid synthesis, nucleic acid synthesis, nucleic acid synthesis. Now, cDNA, the mixture of gp67a,b,c, immune, antibody, antibody.