カイコ体液中のフェノール酸化酵素前駆体活性化カスケードについて

关于蚕体液中酚氧化酶前体激活级联

• 批准号: 05740502
• 负责人: 落合 正則
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05740502/
• 关键词: フェノール酸化酵素前駆体; カスケード; 生体防御機構; 異物認識; beta-1,3-グルカン

フェノール酸化酵素前駆体活性化系(proPOカスケード)は昆虫の生体防御の要であり、無脊椎動物の体液などに存在する。このカスケードはカビや細菌の細胞壁成分により活性化され、これら異物成分各々に対する認識蛋白質と複数のプロテアーゼ前駆体によって構成されていることは判明しているが、詳細は明かではない。本研究はこのカスケード系の生化学的解析を目的としている。以前、研究代表者が発見したカビを認識する蛋白質の機能の解明、及びこの蛋白質が関与するカスケード系内のカビにより活性化する径路を明かにするためにカスケードの再構成系の確立に努めた。カビを認識する蛋白質(beta-1,3-glucan recognition protein;betaGRP)の機能:カイコのbetaGRPとカビの細胞壁成分であるbeta-1,3-glucanの結合様式を探るため、betaGRP中の結合部位を調べた。betaGRPをキモトリプシンで分解すると42kDと20kDのペプチドに分かれ、このうち20kDペプチドがbeta-1,3-glucan結合能を有していることを見いだした。20kDペプチドとbetaGRPのN末端配列が一致することから、20kDペプチドはbetaGRPのN末端側にあり、beta-1,3-glucan結合部位はbetaGRPのN末端付近にあることがわかった。今後、この結果部位の一次構造を決定する予定である。カスケードの再構成実験:カイコの血漿成分を原理の異なる複数のカラムを連結したものに供与することにより、カスケードの構成成分を不活性なまま三画分に分けることに成功した。この方法で得た画分を用いた再構成系は上記の異物成分で活性化され、分画前の血漿成分に含まれるカスケードと同じ性質を有していることが明らかになった。また、これらの画分のうち二つの画分にこれまで検出できなかった活性を見いだし、現在、これらの活性を示す構成因子を精製中である。

The proPO system is essential for insect biological defense and for the presence of invertebrate body fluids. The cell wall components of the bacteria were activated and the foreign body components were identified. The aim of this study is to analyze the biochemical characteristics of the system. Previously, research representatives have been exploring the understanding of protein functions and the establishment of protein interaction pathways within the protein system. The function of beta-1,3-glucan recognition protein (betaGRP): beta-1,3-glucan binding pattern of beta-1,3-glucan in betaGRP and betaGRP cell wall components. betaGRP can be separated from beta-1,3-glucan by 42kD and 20kD. The 20kD binding site is located on the N-terminal side of betaGRP and beta-1,3-glucan binding site is located near the N-terminal side of betaGRP. In the future, the primary structure of the resulting position will be determined. The reconstruction of the blood vessel is a success because the plasma components of the blood vessel are connected and supplied by multiple machines based on different principles, so that the components of the blood vessel are inactivated and divided into three parts. The method is to reconstitute the foreign matter component, activate it, and reconstitute the plasma component before separation. In addition, the activity of the two components is refined.

项目成果

Masanori Ochiai: "The prophenoloxidase cascade of insect:Fractionation of the components in plasma of the silkworm,Bombyx mori" Zoological Science. 6. 11- (1993)

Masanori Ochiai：“昆虫原酚氧化酶级联：蚕血浆中成分的分离，Bombyx mori”《动物学科学》。

Takeshi Shimomura: "Actiuation of the Zymogen of Hepatocyte Growth Factor Activator by Thrombin" The Journal of Biological Chemistry. 268. 22927-22932 (1993)

Takeshi Shimomura：“凝血酶对肝细胞生长因子激活剂酶原的激活”《生物化学杂志》。