麻疹ウイルス野生株からの温度感受性変異株の作成と、そのウイルス学的性状の変化の検討

1)臨床分離麻疹ウイルス(FM-1株)をもとにした温度感受性変異株(tsFM-1株)の作成臨床分離麻疹ウイルス(FM-1株)をマ-モセットBリンパ球由来のB95細胞にて継代した。32℃で培養するとウイルスによる細胞変性(CPE)は当初軽度であったが、継代を重ねるに従い明らかなCPEを示すようになった。20代(5ヶ月)の継代の後には、FM-1株を37℃で培養した場合と同等のCPEを呈するようになったため、低温馴化株(tsFM-1株)が誘導されたと判断した。2)FM-1株とtsFM-1株の神経毒性の比較FM-1株またはtsFM-1株の1×10^4PFU/20mulを新生ハムスターの頭蓋内に接種し、その後8週間、神経症状の発現と生死を観察した。両群とも、明らかな症状を呈したハムスターはなく、神経病原性のあるウイルス株を得ることはできなかった。3)M蛋白コード遺伝子の変異の検討SSCP-PCR法によるM遺伝子変異を検討する準備として、各種麻疹ウイルスのM遺伝子をクローニングした。FM-1株、実験室標準株(Edmonston株、Sugiyama株)、SSPE株(Niigata-1株、Yamagata-1株)よりRNAを抽出し、逆転写反応後、M遺伝子の全蛋白コード領域を増幅するように作成したプライマーを用いて、PCR法を行った。これにより、全5株のM蛋白コード遺伝子をクローニングすることができた。

1)臨床分離麻疹ウイルス(FM-1株)をもとにした温度感受性変異株(tsFM-1株)の作成臨床分離麻疹ウイルス(FM-1株)をマ-モセットBリンパ球由来のB95細胞にて継代した。32℃で培養するとウイルスによる細胞変性(CPE)は当初軽度であったが、継代を重ねるに従い明らかなCPEを示すようになった。20代(5ヶ月)の継代の後には、FM-1株を37℃で培養した場合と同等のCPEを呈するようになったため、低温馴化株(tsFM-1株)が誘導されたと判断した。2)FM-1株とtsFM-1株の神経毒性の比較FM-1株またはtsFM-1株の1×10^4PFU/20mulを新生ハムスターの頭蓋内に接種し、その後8週間、神経症状の発現と生死を観察した。両群とも、明らかな症状を呈したハムスターはなく、神経病原性のあるウイルス株を得ることはできなかった。3)M蛋白コード遺伝子の変異の検討SSCP-PCR法によるM遺伝子変異を検討する準備として、各種麻疹ウイルスのM遺伝子をクローニングした。FM-1株、実験室標準株(Edmonston株、Sugiyama株)、SSPE株(Niigata-1株、Yamagata-1株)よりRNAを抽出し、逆転写反応後、M遺伝子の全蛋白コード領域を増幅するように作成したプライマーを用いて、PCR法を行った。これにより、全5株のM蛋白コード遺伝子をクローニングすることができた。