麻疹ウイルス野生株からの温度感受性変異株の作成と、そのウイルス学的性状の変化の検討

从麻疹病毒野生株中创建温度敏感突变株并检查其病毒学特性的变化

• 批准号: 05857035
• 负责人: 細矢 光亮
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857035/
• 关键词: SSPE; 麻疹ウイルス; 温度感受性変異体; M遺伝子

1)臨床分離麻疹ウイルス(FM-1株)をもとにした温度感受性変異株(tsFM-1株)の作成臨床分離麻疹ウイルス(FM-1株)をマ-モセットBリンパ球由来のB95細胞にて継代した。32℃で培養するとウイルスによる細胞変性(CPE)は当初軽度であったが、継代を重ねるに従い明らかなCPEを示すようになった。20代(5ヶ月)の継代の後には、FM-1株を37℃で培養した場合と同等のCPEを呈するようになったため、低温馴化株(tsFM-1株)が誘導されたと判断した。2)FM-1株とtsFM-1株の神経毒性の比較FM-1株またはtsFM-1株の1×10^4PFU/20mulを新生ハムスターの頭蓋内に接種し、その後8週間、神経症状の発現と生死を観察した。両群とも、明らかな症状を呈したハムスターはなく、神経病原性のあるウイルス株を得ることはできなかった。3)M蛋白コード遺伝子の変異の検討SSCP-PCR法によるM遺伝子変異を検討する準備として、各種麻疹ウイルスのM遺伝子をクローニングした。FM-1株、実験室標準株(Edmonston株、Sugiyama株)、SSPE株(Niigata-1株、Yamagata-1株)よりRNAを抽出し、逆転写反応後、M遺伝子の全蛋白コード領域を増幅するように作成したプライマーを用いて、PCR法を行った。これにより、全5株のM蛋白コード遺伝子をクローニングすることができた。

1) bed-isolated measles (FM-1 strain), temperature-sensitive strain (tsFM-1 strain), bed-isolated measles (FM-1 strain), bed-isolated measles (FM-1 strain), B95 cells (B95). The temperature is 32 ℃. The temperature is very high (CPE). In the first place, the temperature is very high, and the temperature is very high. In the first place, the temperature is very high. The temperature is 32 ℃. The temperature is 32 ℃. The temperature is very high, and the temperature is very high. After the 20th generation (May month), FM-1 strain was cultured at 37 ℃ and the same CPE was detected. The cold-treated strain (tsFM-1 strain) showed a negative response. 2) the virulence of FM-1 strain TsFM-1 strain was higher than that of FM-1 strain and tsFM-1 strain 1 × 10 ^ 4PFU