1) Structure/Function analysis of myosins and micronemal proteins: as potential invasion factors of Toxoplasma gondii 2) Development of a regulated gene expression system

1) 肌球蛋白和微线蛋白的结构/功能分析：作为弓形虫的潜在入侵因子 2) 调控基因表达系统的开发

• 批准号: 5261270
• 负责人: Professorin Dr. Dominique Soldati-Favre, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Départment de Microbiologie et Medecine Moleculaire
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Priority Programmes
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1995-12-31 至 2002-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5261270?language=en
• 关键词: Structure; Function; analysis; myosins; micronemal

Wirtszellinvasion ist der erste erforderliche Schritt für dieEtablierung einer Infektion durch Apicomplexa. Die sog."gleitende Beweglichkeit" ist hierbei Grundvoraussetzung und wird durch das Aktomyosin-System des Parasiten angetrieben. Um die Mechanismen der Invasion auf molekularer Ebene zu entschlüsseln, haben wir Myosine aus T. gondii kloniert und in ihren Grundzügen charakterisiert. Durch Methoden der reversenGenetik wurden grundlegende Informationen über die subzellu- läre Lokalisierung dieser Motoren erhalten. Zwei Myosine (MyoAund MyoD) lokalisieren exakt unterhalb der Plasmamembran des Parasiten und wären in einer idealen Position, mechanische Energie zu übertragen und so Gleiten und Zellinvasion anzu- treiben. Weiterhin haben wir ein nahe verwandtes Homolog dieser beiden Myosine aus Plasmodium falciparum charakterisiert. Unsere Ziele sind nun, zu bestimmen, welche bzw. welches dieser Myosine in die "gleitende Beweglichkeit" involviert sind bzw. ist, und ihre Funktionsweise zu bestimmen. Auf der Suche nach Partnern von Myosinen während des Invasionsprozesses haben wir eine neue Familie von transmembranen, mikronemalen Proteinen aus T. gondii entdeckt und näher charakterisiert. Diese werden zum Zeitpunkt der Invasion ausgeschüttet und weisen homologe Domänen mit Proteinen auf, welche aus anderen Mitgliedern des Stammes Apicomplexa beschrieben wurden. Diese Beobachtung unterstützt die Vorstellung eines gemeinsamen molekularen Mechanismus der Wirtserkennung, -anheftung und -invasion in diesem Stamm. Die mikronemalen Proteine setzen sich aus Modulen zusammen, die auf verschiedene Weise kombiniert werden können, dadurch wird deren Komplexität erhöht. Adhäsive Domänen wie das TSP-verwandte Motiv (Thrombospondin), die A-Domäne (Integrine), die EGF-like Domäne (Notch, Fibrillin), die Apple-Domäne (Kallikrein, Faktor XI) lassen sich in einer großen Anzahl in Proteinen höherer Eukaryoten finden, dort sind diese Proteine in Protein-Protein Wechselwirkung oder Zell-Zell Interaktion involviert. Diese Motive sind in variierender Anzahl und Kombination, mit oder ohne transmembrane und cytoplasmatische Domäne, in Proteinen der Apicomplexa vorhanden. Die Bedeutung dieses modularenBaukastensystems ist noch nicht geklärt. Zusätzlich sind einige dieser Proteine stark antigenisch und stellen somit potentielle Vakzinkandidaten dar. Durch Charakterisierung des genomischen Lokus, Produktion spezifischer Antikörper gegen unterschiedliche Domänen der Proteine und Generierung von KO-Mutanten haben wir in letzterZeit die nötigen Werkzeuge geschaffen, um die Funktionen dieser beiden potentiellen Klassen von Invasionsfaktoren nun näher bestimmen zu können. Zur Untersuchung der Biogenese, Lokali- sierung, Prozessierung und Sortierung dieser neuen Proteine wurden auch Ansätze der reversen Genetik verwendet, wie Deletionen, ortsspezifische Mutationen und GFP Fusionskon- strukte. Das Fehlen eines Systems zur kontrollierten Gen- expression in Apicomplexa behindert immer noch die Untersuchung der Funktion essentieller Gene. Es ist offensichtlich, daß einsolches System mit zu den Voraussetzungen einer Untersuchung der Invasion mit Hilfe von gentechnischen Methoden in vivo gehören würde. Modifikationen der bisherigen Ansätze und Untersuchung neuer Strategien werden auf die Entwicklung eines solchen Systems abzielen.

Wirtszellinvasion ist der erste erforderliche Schritt für dieEtablierung einer Infektion durch Apicomplexa.死sog。“gleitende Beweglichkeit”是一种基础性的生物学现象，它是通过Aktomyosin--寄生虫系统产生的。在分子入侵的机制中，我们从T.弓形虫克隆体和其基本特征。Durch Methoden der reversenGenetik wurden grundlegende Informationen über die subzellu- läre Lokalisierung dieser Motoren erhalten。两种肌红蛋白（MyoAund MyoD）均能在理想的位置、能量机制和消化吸收等方面发挥寄生虫的作用。此外，我们还发现了一种具有恶性疟原虫特征的肌氨酸同源物。我们的Ziele是一个很好的朋友。在“欢乐之旅”中的肌氨酸是bzw。这是最好的功能。在Myosinen侵袭过程中，我们发现了一个新的跨膜蛋白家族，即T.弓形虫感染和其他特征。这种韦尔登的时间点也是通过蛋白质的同源性来确定的，也就是说，从顶部复杂的Stammes的Mitgliedern来确定。这些研究揭示了前体细胞的一种共同的分子机制，即在细胞中的激活、增强和侵入。微蛋白质从模块中提取出来，然后通过韦尔登测试，最终会得到复杂的结果。粘附性结构域如TSP-特异性基序（Thrombospondin）、A-结构域（Integrin）、EGF样结构域（Notch、Fibrillin）、Apple-结构域（Kallikrein、Faktor XI）等在真核细胞中的高表达蛋白质中具有较大的结合力，但这些蛋白质在蛋白质-蛋白质相互作用或Zell-Zell相互作用中不起作用。这种动机是多种多样的结合和组合，包括跨膜和胞质结构，在顶端复合体蛋白中。这些模块化的建筑结构系统还不够好。Zusätzlich sind einige dieser Proteine stark antigenisch and stelen somit potentielle Vakzinkandidaten dar.根据基因组学的特点，生产特定的抗微生物抗体可以使KO-Mutanten的蛋白质和生成物的领域变得更加广泛，我们可以在新的工作时间内进行研究，从而使功能更有可能被入侵的细菌所破坏。对新蛋白的生物发生、定位、扩增和分选的研究，也可以通过缺失、突变和GFP融合等逆转录基因的构建来进行。这是一个控制顶复形虫基因表达的系统，它始终落后于必需基因功能的研究。这是一种犯罪，一种使用生物技术方法的入侵检测系统。在软件系统的开发中，对软件系统进行修改和新的软件开发韦尔登。