3色FISH法を用いた運動能良好ヒト精子の染色体異数性に関する研究

三色FISH法研究高活力人类精子染色体非整倍性

• 批准号: 06771338
• 负责人: 三春 範夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771338/
• 关键词: FISH; disomy精子; diploid精子; swim-up

【方法】4人の健康男性から採取した精液をm-BWW(modified Biggers,Whitten and Whittingham)液で洗浄した後1時間Swim-upし、上層の運動良好精子(A群)と下層の精子(B群)を分離回収した。両群精子および原精液の精液パラメーター(精子濃度、運動率、精液量)を検査した後、両群の精子をスライドグラス上に固定しdithiothreitolで前処理してFISH(Fluorescence in situ hybridization)法に供した。FISH法はOncor社のD17Z1、D18Z1の2種類のDNAプローブを用いたdual color法で行い、蛍光顕微鏡下に各々最低6000個の精子核について二人の検者による二重盲検でスポット数を算定した。【結果】いずれの例も原精液パラメーターはWHOの基準を満たす正常値で、A群精子はB群精子より良好な運動率を示した。FISH法では、総数48582個の精子のうち48512個(99.9%)で判定可能なスポットが得られた。その結果、17番、18番のdisomy精子の頻度はA群では平均0.11%(0.08-0.12%)、0.08%(0.05-0.15%)、B群では平均0.12%(0.08-0.15%)、0.10%(0.07-0.17%)で両群間に全く差異を認めず、一方diploid精子の頻度は、各々0.11%(0.06-0.18%)、0.21%(0.12-0.40%)でA群で低い傾向が見られたが、いずれも両群間に統計学的には有意差を認めなかった。【結論】FISH法は多数の精子についての数的染色体異常の検討に有用であることが確認された。Swim-up法は運動良好精子の分離には有効でdiploid精子の分離にも多少関与しているが、しかしdisomy精子の分離には直結しないことが示唆された。

【 Method 】 Four <s:1> healthy men ら ら collected <s:1> た semen をm-BWW(modified Biggers,Whitten and Whittingham) liquid で to wash the <s:1> た. One time later, swam up <s:1>, the upper layer of well-motile <s:1> sperm (group A)と the lower layer of sperm (group B)を were isolated and retrieved from the た. That struck group of sperm お よ び original sperm の パ ラ メ ー タ ー (sperm concentration, movement rate, semen volume) を 検 check し た, struck group after の sperm を ス ラ イ ド グ ラ ス に し fixed on dithiothreitol で 処 before Richard し て FISH (Fluorescence in situ The hybridization method に is used for the publication of た. FISH method は Oncor club の D17Z1, D18Z1 の 2 kinds の プ DNA ロ ー ブ を with い た で い, dual color method 蛍 optical 顕 microscopically に に 々 minimum 6000 の sperm nucleus つ い て duo の 検 person に よ る double blind 検 で ス ポ ッ ト number を consider し た. 【 results 】 い ず れ の example も original semen パ ラ メ ー タ ー は WHO の benchmark を against た normal numerical で す, A group of sperm は B group of sperm よ り を な movement rate and shown good し た. FISH method で は, 総 number 48582 の sperm の う ち 48512 (99.9%) で determine possible な ス ポ ッ ト が have ら れ た. そ の results, 17 and 18 times の disomy sperm の frequency は group A で は an average of 0.11% (0.08 0.12%), 0.08% (0.05 0.15%) and B group で は average 0.12% (0.08 0.15%), 0.10% (0.07 0.17%) で struck に く all differences between group を め ず, A diploid sperm の frequency は, each 々 0.11% (0.06 0.18%), 0.21% (0.12 0.40%) で see A group of low で い tendency が ら れ た が, い ず れ も struck between group に statistical に は deliberately bad を recognize め な か っ た. 【 Conclusion 】 The FISH method is used to determine chromosomal abnormalities in the number of に, に, て and て of <s:1> sperm in the majority. Youdaoplaceholder2 is useful for に, である, とが, and とが for confirming された. Swim - up method of separation of に は movement good sperm の は have sharper で diploid sperm separation の に も how many masato and し て い る が, し か し disomy sperm separation の に は straight knot し な い こ と が in stopping さ れ た.