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アクチビンの下垂体細胞に対する分化誘導能に関する研究

激活素诱导垂体细胞分化能力的研究

基本信息

批准号：
06771341
负责人：
漆川敬治
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771341/
关键词：
アクチビン GH_3細胞プロラクチン成長ホルモンレセプター

项目摘要

1.GH_3細胞(ラットの下垂体腫瘍由来の株細胞で成長ホルモン(GH)やプロラクチン(PRL)を産生する)をHAMF-10(15%HS、2.5%FCS)を培養液として、2×10^5cells/mlとなるように調整し、48時間培養後、アクチビンを0〜30nMの濃度で添加し、さらに4日間培養し、FSH産生能の有無について検討した。NIDDKD RIA kitを用いて培養上清のFSH濃度を測定した結果、測定感度(2ng/ml)以下であった。このことから、アクチビンはGH_3細胞にFSH産生能を誘導する作用はないと考えられた。2.同様の条件で、アクチビンを培養上清に添加し、48時間培養し、GH_3細胞のPRLおよびGHの産生に及ぼす影響について検討した。NIDDKD RIA Kitを用いた上清中の濃度測定では、アクチビンは0-3nMの範囲でPRL濃度を用量依存性に抑制した(最大55%)。上清中のGH濃度には有意な影響を与えなかった。3.同様の条件でアクチビンを添加し培養したGH_3細胞内でのPRLおよびGHのmRNAの発現量をNorthern Blot Analysisにて検討した。アクチビンはGH_3細胞のPRL mRNA発現を抑制したが、GH mRNA発現には影響を及ぼさなかった。4.GH_3細胞のアクチビンレセプター発現の有無をRT-PCR法により検討した。GH_3細胞はアクチビンレセプターのうちII型に関してはType IIとType IIBの発現が、またI型に関しても一種類のレセプターの発現があることを確認した。さらに新しいI型レセプターサブタイプの発現も確認され、一部の塩基配列の解読から、これがヒトで報告されているアクチビンI型レセプターに相当するものであり、塩基配列95%、アミノ酸配列では100%のホモロジーを持つことを明らかにした。

1. GH_3 cells (GH and PRL) were cultured in HAMF-10(15%HS, 2.5%FCS) medium at 2× 10^5 cells/ml for 48 hours, then added at 0 - 30nM for 4 days. NIDDKD RIA kit was used to determine FSH concentration in culture supernatant and sensitivity (2ng/ml). The effect of FSH production on GH_3 cells was studied. 2. Under the same conditions, the culture supernatant was added, the culture time was 48 hours, the PRL and GH production of GH_3 cells and the effect of culture time were studied. NIDDKD RIA Kit can be used to determine the concentration of PRL in the supernatant in a dose-dependent manner (up to 55%) over a range of 0-3nM. GH concentration in the supernatant is intentionally affected. 3. Northern Blot Analysis was used to investigate the mRNA expression of PRL and GH in GH_3 cells cultured under the same conditions. The expression of PRL mRNA in GH_3 cells was inhibited and GH mRNA expression was affected. 4. The detection of GH_3 cell apoptosis by RT-PCR Type II and Type IIB were identified in GH_3 cells, and Type I and Type II were identified. In addition, the development of new type I photovoltaics was confirmed, a part of the photovoltaics was released, and the photovoltaics were reported. The photovoltaics were 95%, and the photovoltaics were 100%.