前庭病態モデルにおける平衡斑の炭酸脱水素酵素の分布と活性

前庭病理模型平衡斑块中碳酸酐酶的分布和活性

基本信息

  • 批准号:
    06771384
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
  • 财政年份:
    1994
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1994 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

最初に正常モルモット、正常マウスの卵形嚢平衡斑について、炭酸脱水素酵素の局在を検討した。側頭骨から顕微鏡下に取り出した試料を4%パラホルムアルデヒド中に固定し、炭酸脱水素酵素I、II、III、IV、V、VI型に対するモノクローナル抗と反応させ、次にFITC標識した2次抗体と反応させ、共焦点レーザー顕微鏡にて観察した。その結果、hair cell,supporting cell,transitional cell,dark cellのいずれにも蛍光は検出されなかった。蛍光in situハイブリダイゼーションによるmRNAの検出についても同様で、いずれの部位にも蛍光は見出されなかった。免疫組織化学的には、本酵素は平衡斑に存在することが既に示されており、我々の実験における検出の失敗は、抗体・プロープの組織内への拡散の問題、蛍光強度の問題によるものと思われる。これを解決するためには組織を数十〜100μm程度の厚さに切ること、また、蛋白レベルでの検出にはABC法などによる信号の増幅を行なうこと、mRNAレベルではin situ PCR法を用いて信号を増幅することなどが必要であると考えられる。
Initially, the normal protein, the normal protein, the ovoid protein, and the carbonic acid dehydratase were investigated. 4% of the samples were extracted from the skull under microscope, immobilized in type I, II, III, V and VI of the enzyme, and examined under microscope with secondary FITC antibodies. The results, hair cell,supporting cell,transitional cell,dark cell are hidden in the light. The expression of mRNA in situ is similar to that in situ, and the expression of mRNA in situ is similar to that in situ. Immunohistochemical studies show that the enzyme balance is present, and that there is a problem with antibody dispersion in tissues, and a problem with light intensity. For example, if a protein is detected, the signal amplitude of the ABC method is increased. If a protein is detected, the signal amplitude of the ABC method is increased.

项目成果

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