下顎頭軟骨に対するモノクローナル抗体の作製と免疫組織化学的観察

抗下颌髁软骨单克隆抗体的制备及免疫组化观察

• 批准号: 06771574
• 负责人: 馬場 麻人
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771574/

本年はBrdUを用い、軟骨組織の発育において検索を行った。BrdUはDNA合成期の細胞のDNAのthymidineの位置に積極的に取り込まれる。従って、in vivo,in vitroにおいてBrdU投与後、抗BrdU抗体を用いて免疫組織化学観察を行うことにより、組織内での細胞の増殖および位置変化の検索が可能である。本研究では、成長期にある14日令のラットを用い、BrdUを投与後、一定時間後に下顎頭軟骨を摘出し、70%アルコール固定液で固定を行い、通法に従い、パラフィン切片を作製し、抗BrdU抗体を用い、免疫組織化学的に染色を行い、光顕的に観察を行った。投与後3時間では、BrdUのラベルは、下顎頭の表層部に強く認められ、下顎頭軟骨の層区分では、骨軟骨プロゲニタ層にBrdUのラベルをもつ細胞が観察された。また一部では、軟骨芽眼細胞層の分化の初期段階の層にもBrdUの取り込みが観察された。投与後3日後では、下顎頭最表層の線維層から軟骨芽細胞層にいたる領域でラベルは観察された。5日後以降では、BrdUのラベルは、軟骨細胞層、肥大軟骨細胞層を含む、軟骨全層で観察された。また、時間経過とともに、ラベルを持つ細胞は減少するとともに、反応も減弱した。以上より、下顎頭軟骨では、骨軟骨プロゲニタ層の細胞分裂帯から細胞は分裂し、時間の経過とともに軟骨芽細胞、軟骨細胞、肥大軟骨細胞へと分化するものと、軟骨膜へと分化するものと、2通りが観察された。またラベルされた細胞の分化は同調せず、分化速度にもバラつきがあることがわかった。今後、種々BrdUラベリング法を用い、さらに軟骨細胞の分化の過程を検索し、モノクローナル抗体作製に有効な抗原について検討する予定である。

This year, the use of BrdU, cartilage tissue development in the middle of the study. BrdU is active in the position of thymidine in the DNA synthesis phase of cells. After administration of BrdU in vivo,in vitro, immunohistochemical examination with anti-BrdU antibodies is possible. In this study, the mandible head cartilage was extracted after BrdU was administered for a certain period of time, fixed in 70% sodium chloride fixative solution, prepared in general method, prepared in paraffin section, used in anti-BrdU antibody, stained by immunohistochemistry, and observed by light. 3 hours after the injection, BrdU and the surface layer of the mandible head are strongly recognized, the cartilage layer of the mandible head is differentiated, and the cartilage layer of the mandible head is observed. A part of the cartilage bud cell layer of the initial stage of differentiation of the layer of BrdU was observed. Three days after injection, the most superficial layer of the mandible was observed in the cartilage bud cell layer. After 5 days, the cartilage layer, hypertrophic cartilage layer and whole cartilage layer were observed. The time limit is too high, and the time limit is too low. The cell division of cartilage, cartilage and cartilage layer of mandible head is observed in the following ways: cell division, chondrocyte differentiation, chondrocyte differentiation. The differentiation of the cells is homologous, and the differentiation speed is different. In the future, the use of the BrdU assay will be discussed in detail, including the identification of chondrocyte differentiation processes and the identification of specific antigens for antibody production.