分子生物学的手法を用いてのニコチン受容体チャネルに対する細胞外ATPの作用の検討

利用分子生物学方法研究细胞外 ATP 对烟碱受体通道的影响

• 批准号: 06772118
• 负责人: 中澤 憲一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: 国立衛生試験所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772118/
• 关键词: ニコチン様アセチルコリン受容体; アデノシン5′-ミリン酸(ATP); 相補的DNA(cDNA); アフリカツメガエル卵母細胞; 膜電位固定法; イオン-チャネル

ニコチン様アセチルコリン受容体チャネルのcDNAをイギリスおよびアメリカの研究グループより入手し,アフリカツメガエル卵母細胞に2種類の方法を用いて発現させた.一方はcDNAより転写したRNAの細胞内への注入であり,他方は真核細胞発現型プラスミドを用いたcDNAの核内注入である.いずれの方法でも機能的なアセチルコリン受容体チャネルは発現したが,RNAを用いる方が安定した発現が得られた.以下,この方法でATPの作用を検討した.ATPはこの卵母細胞において100fM-1μMという低濃度でアセチルコリンにより惹起される電流を抑制した.この抑制は受容体チャネルを構成するサブユニットの組合せを変化させた場合でも観察された.抑制の度合は膜電位変化には影響されなかったが,アセチルコリンの濃度を上昇させることにより減弱した.ADP,UTPのようなATPの関連化合物も同様にアセチルコリンによる電流を1μM以下で抑制した.一方,ドパミン受容体あるいはセロトニン受容体といった他の神経伝達物質の受容体に影響する薬物でもアセチルコリンによる電流は抑制されたが,抑制に必要な濃度は3-1001μMとATPより高いものであった.以上のことから,アセチルコリン受容体に高親和性のATP結合部位があること,そしてこの結合部位が受容体チャネル抑制を惹起することが初めて示された.この様な抑制は並行した行った神経細胞様培養クローンPC12細胞でも観察されており,生体内でのATPによるニコチン様神経伝達の抑制性調節を示唆するものである.

ニ コ チ ン others ア セ チ ル コ リ ン by let body チ ャ ネ ル の cDNA を イ ギ リ ス お よ び ア メ リ カ の research グ ル ー プ よ り し, ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル oocytes に 2 kinds の way を with い て 発 now さ せ た. Party は cDNA よ り planning write し た RNA の intracellular へ の injection で あ り, fang は eukaryotic cell type 発 now プ ラ ス ミ ド を with い た cDNA の intranuclear injection で あ る. い ず れ の way で も functionary な ア セ チ ル コ リ ン by let body チ ャ ネ ル は 発 now し た が, RNA を with い る party が settle し た 発 が must now ら れ た. The following, こ の way で ATP の role を beg し 検 た. ATP は こ の oocytes に お い て 100 mu FM - 1 M と い う low concentration で ア セ チ ル コ リ ン に よ り provoked さ れ る current を inhibit し た. こ の inhibit は by let body チ ャ ネ ル を constitute す る サ ブ ユ ニ ッ ト の combination せ を variations change さ せ た occasions で も 観 examine さ れ た. Inhibit の degrees or は membrane potential variations change に は influence さ れ な か っ た が, ア セ チ ル コ リ ン の concentration rising を さ せ る こ と に よ り abate し た. ADP, UTP の よ う な ATP の masato も even compounds with others に ア セ チ ル コ リ ン に よ る current を で inhibition under one mu M し た. Side, ド パ ミ ン by let body あ る い は セ ロ ト ニ ン by let body と い っ た の god 経 の 伝 of material affected by the capacity of body に す る 薬 content で も ア セ チ ル コ リ ン に よ る current は inhibit さ れ た が, inhibit に な concentration necessary は 3-1001 microns と ATP よ り high い も の で あ っ た. Above の こ と か ら, ア セ チ ル コ リ ン by let body に high-affinity の ATP binding site が あ る こ と, そ し て こ の combining site が by let body チ ャ ネ ル inhibit を provoked す る こ と が early め て in さ れ た. こ の others な inhibit は parallel し た line っ た god 経 cell others culture ク ロ ー ン PC12 cells で も 観 examine さ れ て お り, born in vivo で の ats Pによるニコチ <e:1> the samagami myotoki 伝 achieved inhibitory regulation of を, indicating する <s:1> である である である.

项目成果

Nakazawa,K.,et al.: "Block by apomorphine of acetylcholine veceptor ohannels expvessed in Xenopus oocytes" European Journal of Pharmacology. 269. 375-379 (1994)

Nakazawa,K.,et al.：“非洲爪蟾卵母细胞中表达的乙酰胆碱载体通道被阿朴吗啡阻断”欧洲药理学杂志。

Nakazawa,K.,et al.: "Iuhibition by apomorphine and other compounds velated to dopamine receptors of neuronal acetylcholine veceptor chaunels expressed in xeuopus oocytes" Japanese Joumal of Pharmacology. 67suppl.I. 166 (1995)

Nakazawa,K.,et al.：“阿朴吗啡和其他化合物对爪蟾卵母细胞中表达的神经元乙酰胆碱载体通道的多巴胺受体的抑制作用”《日本药理学杂志》。

Ito,K.,Nakazawa,K.,et al.: "P2 purlnoceptors highly sensrtive to ATP and UTP thst medlate inhibition of nicotiuic acetylcholine receptors in PC12 cells" Japanese Joumal of Pharmacology. 67suppl.I. 166 (1995)

Ito,K.,Nakazawa,K.,et al.：“P2 purnoceptors 对 ATP 和 UTP 高度敏感，可抑制 PC12 细胞中的烟酸乙酰胆碱受体”，《日本药理学杂志》。