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ムスカリン受容体の脱感作機構における内在性蛋白質(IPFα)の役割の解明

阐明内源蛋白（IPFα）在毒蕈碱受体脱敏机制中的作用

基本信息

批准号：
06772147
负责人：
黄洋一
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

脱感作現象はアゴニストにさらし続ける時間によって短時間型および長時間型に分類されるが、後者は多くの場合細胞膜上の受容体数の減少を伴うことが報告されている。一方、我々がモルモット回腸縦走筋の可溶性画分に見いだした内在性タンパク質(Inhibitory Protein Factor α;IPFα)は、ムスカリン受容体に対する放射性リガンド結合の親和性には影響せず、その結合部位を減少させることから細胞膜上の受容体数の調節に関与する可能性がある。本研究では、脱感作に伴う受容体数の減少にIPFαが関与するか否かについて検討した。ムスカリン受容体の脱感作により、活性薬に対する細胞の刺激応答性(細胞内Ca^<2+>濃度上昇など)が減弱する。IPFαが活性薬による細胞内Ca^<2+>濃度上昇を減弱するか否かについて明かにするため、まず、CAF100型カルシウム蛍光測定装置による細胞内Ca^<2+>濃度変化の測定法について検討した。本測定装置は、本来、細胞懸濁液を測定用試料とするため、単離平滑筋細胞を用いて検討したがアゴニストに対する反応性を保持した細胞を得ることが困難であった。そこで、なるべく平滑筋組織本来の性質を保持した細胞のカルシウム動態を解析するため、回腸縦走筋ミンスを用いた細胞内Ca^<2+>濃度の測定法を開発した。現在、IPFαの作用について検討している。IPFαの細胞内含量は全可溶性タンパク質のおよそ6.5%であり、このような主要な成分が細胞内で受容体に作用しこれを調節するという機構は考えにくい。そこで、IPFαの作用機序としては何らかの機構により細胞外に遊離されムスカリン受容体に作用する可能性が考えられた。今回、回腸縦走筋のミンスを種々の条件下でカルバミルコリンにり刺激したが、IPFαの遊離は確認できなかった。しかし、細胞障害を伴う患者においてIPFαは細胞外に遊離すると考えられることから、病態下における組織の機能的変化にIPFαが関与している可能性がある。これについては今後の検討としたい。遠心洗浄法による検討の結果、IPFαのムスカリン受容体に対する作用は可逆的であることが明かとなった。このことからIPFαの阻害作用は、酵素反応に於ける非競合的阻害様式に類似すると考えられた。現在、IPFαとムスカリン受容体との相互作用の、速度論的モデルについて検討している。

Classification of desensitization phenomenon: short-term type and long-term type In the latter case, when the number of receptors on the cell membrane decreases, the number of receptors on the cell membrane decreases and the number of receptors on the cell membrane decreases. On the one hand, I am the ileum of the ileum and the soluble draw points of the ileum and the inner soluble protein factor (Inhibitory Protein Factor α;IPFα), ムススカリン acceptor, radioactive reagent binding affinity, influence , the binding site is reduced, the number of receptors on the cell membrane is reduced, and the possibility of regulating the number of receptors on the cell membrane is related. In this study, it was found that desensitization was associated with a reduction in the number of recipients and the relationship between IPFα and whether it was possible to reduce the risk of desensitization. The desensitization of receptors and the stimulation response of active cells (increased intracellular Ca^<2+> concentration) are weakened. The activity of IPFα is reduced and the intracellular Ca^<2+> concentration rises and is weakened. The CAF100 type カルシウムphotometric measuring device is a method for measuring changes in intracellular Ca^<2+> concentration. This measurement device is originally intended for use with cell suspensions, measurement samples, and isolated smooth tendon cells.て検问したがアゴニストに対するReflexivity をKeep the したcell をget ることがdifficulty であった.そこで、なるべくSmooth tendon tissue's original propertiesをmaintainsしたcell's dynamicをanalysisすThe method of measuring intracellular Ca^<2+>concentration was used to treat ileal tendon muscle contraction. Now, the role of IPFα is clear. The intracellular content of IPFα is 6.5% of the total soluble protein content of IPFα. The main ingredient is the receptor that acts on the cell and regulates the mechanism of the action.そこで、IPFα's mechanism of action and mechanism によりExtracellular free されムスカリン receptor にeffect するPossibility of えられた. This time, the ileum is stimulated under the condition of ileum muscle contraction, and the IPFα is free and confirmed.しかし、Patients with cell disorders においてIPFαはExtracellular にfree するとtest えられるこIt is related to the possibility of changing the function of tissues under pathological conditions and IPFα.これについては will be discussed in the future. The results of the telecentric cleansing method and the action of the IPFα receptor are reversible. The inhibitory effect of IPFα and enzyme reaction are similar to the non-competitive inhibitory effect of IPFα. Now, IPFαとムスカリン acceptor and interactionの, velocity theoryモデルについて検している.