Spheroplast型結核菌の作製とその検出意義

原生质球型结核分枝杆菌的制备及其检测意义

• 批准号: 06772226
• 负责人: 布施川 久恵
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772226/
• 关键词: PCR法; 抗酸菌; 結核菌; Spheroplast型結核菌; 1%小川培地; 培養法

PCR法による抗酸菌の検出は,迅速性,感度の点で従来法に比べ優れており,臨床検査として期待されている。しかしながら,従来法の塗抹・培養検査で検出されず,PCR法ではじめて検出されるものが,我々の検討の結果約20%に認められた。その原因として,我々は細胞壁を欠損し細胞内で代謝しているが増殖できないL型菌またはspheroplast型(休眠菌あるいは潜在菌で乾酪巣内の苛酷な条件で生存するために形態を変化させる)結核菌の存在を想定した。生体内のL型菌の証明は,結核の再燃の原因として重要と考えられる。そこで本研究は,細胞壁の欠損したspheroplast型結核菌をin vitroで作製し,PCR法と小川培地での研究結果を比較し,その検出意義を明らかにすることを目的とした。spheroplast型結核菌は,結核菌標準菌株をアルブミンを除いたDubos液体培地に,グリシン,ショ糖,リゾチームを添加し,振とう培養を続け作製を試みた。spheroplast型結核菌の同定は,チールネルゼン染色及び抗BCG抗体染色を行い,光学顕微鏡にて行なった。約3週間の後,Spehroplast型結核菌の作製に成功した。spheroplast型結核菌と結核菌標準菌株の菌液の希釈系列を作り,それぞれ同量の菌液をPCR法と従来の培養に用いられている1%小川培地で検出を試みた。その結果,PCR法では標準菌株,spheroplast型ともに,およそ4個/mlより検出可能であった。一方、小川培地を用いた培養法では,標準菌株はおよそ400個/mlから3コロニー検出できたが,speroplast型結核菌は検出できなかった。spheroplas型結核菌と同様の存在様式が,臨床検体において塗抹・培養法陰性でPCR法のみ陽性の原因の一つである可能性が示唆された。

PCR method for the detection of acid-fast bacteria, rapid, sensitive point, compared with the previous method, clinical examination and expectations. The result of PCR method was about 20%. The reason for this is that the presence of L-type bacteria and sphereoplast (dormant bacteria, latent bacteria, cheese, harsh conditions for survival, morphological changes) is expected to be stable due to cell wall damage, intracellular metabolism, and proliferation. The proof of L-form bacteria in the body is important and the cause of tuberculosis reburning is well documented. This study aims to compare the results of PCR and Ogawa's study on the control of sphereoplast tuberculosis in vitro, and to clarify the significance of detection. Spheroplast tuberculosis, tuberculosis standard strains, Dubos liquid culture, isolation, vibration culture, isolation. Spheroplast tuberculosis was identified by staining with anti-BCG antibodies and by optical microscopy. About 3 weeks later,Spehroplast tuberculosis was successfully controlled. Spheroplast and tuberculosis standard strains of bacteria in the hope of a series of tests, including the same amount of bacteria in the PCR method and culture in the medium of less than 1% of the small amount of culture in the test. The PCR method was used to detect the standard strain, sphereplast type, 4/ml. The standard strain is 400 cells/ml, and the speroplast type tuberculosis is detected. Spheroplas-type tuberculosis and the same species exist in different ways, and the possibility of the reasons for negative smear culture and positive PCR is also discussed.