キャピラリー電気泳動による結核菌IS6110遺伝子反復配列の検出とその臨床応用

毛细管电泳法检测结核分枝杆菌IS6110基因重复序列及其临床应用

• 批准号: 08772186
• 负责人: 布施川 久恵
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772186/
• 关键词: 結核菌; IS6110遺伝子; PCR; DNA; フィンガープリント; アクリルアミドゲル電気泳動; キャピラリー電気泳動; スクニワプラスト型結核菌

結核の病態は,近年複雑化,多様化している。そのため,適切な病態の診断には迅速な菌の検出とともに治療反応性や伝播経路など質的情報の重要性が増している。現在質的情報としては,薬剤耐性試験が唯一の方法であるが,長期間を要し培養不可能な菌では行えないなど困難な点が多い。IS6110遺伝子の反復配列は,結核菌遺伝子内に挿入される部位と反復回数が結核菌菌株ごとにより異なるため,その反復配列パターンの解析は,治療反応性や病原性と密接な関係を持つ菌株のマーカーとなりうる。そこで,我々は新たな方法として菌から抽出したDNAをPCR法を用いて増幅しIS6110遺伝子のフィンガープリント検出を試みた。対象は,結核菌特異的IS6110遺伝子が複数検体から検出された9例(18検体)で,内訳は検索した2検体とも培養陽性4例,培養陽性1検体・陰性1検体1例,2検体ともに陰性4例で,対照として結核菌標準菌株,結核菌標準菌株から作製したスフェロプラスト型(細胞壁が欠損しているため抗結核剤治療に抵抗性をもち,宿主の免疫反応から逃れ乾酪壊死巣内に長期間滞まっているが培養検出不可能)結核菌を用いた。各種検体から抽出したDNAについて,フィンガープリント解析を行なった。フィンガープリントを検出するプライマーは,IS6110遺伝子の反復配列の3'末端,5'末端よりに,外側に伸長反応するように設定した。フィンガープリントパターンは,得られたPCR産物をアクリルアミドゲル電気泳動で解析した。フィンガープリントの解析は,症例ごとに,また同一症例の異なる検体ごとに行ないパターンを比較したところ,9例全て同一症例異検体で同一パターンが検出された。また,パターン症例ごとに異なった。さらに,培養陽性1検体・陰性1検体の1例,培養可能な結核菌標準菌株と培養不可能なスフェロプラスト型結核菌ともに同じパターンが検出された。キャピラリー電気泳動とアクリルアミドゲル電気泳動との結果を比較し,同様の結果が得られた。結核菌IS6110遺伝子の反復配列のフィンガープリントパターン解析は,直接検体から検出可能であるため,長期の培養を待たずに迅速にかつ培養陰性の症例においても治療反応性など性状を異にする菌株の同定や疫学的調査に利用できるものと考えられる。

The pathological changes of tuberculosis have been complicated and diversified in recent years. Therefore, the importance of appropriate diagnosis of pathologies, such as rapid detection of pathogens, and qualitative information on treatment responses and transmission pathways, has increased. Now the quality of information and resistance test is the only way to do so, long-term cultivation is impossible, and there are many difficulties. IS6110 gene repeat alignment, tuberculosis gene insertion site, repeat loop number, tuberculosis strain, different, repeated alignment, reverse analysis, treatment of anti-tuberculosis and pathogenic close contact relationship, strain maintenance. We have developed a new method to extract DNA from IS6110. In contrast, 9 cases (18 samples) of IS6110 gene specific for tuberculosis were detected, 2 samples were detected, 4 samples were positive in culture, 1 sample was positive in culture, 1 sample was negative in culture, and 4 samples were negative in culture.(The cell wall is damaged due to resistance to anti-tuberculosis treatment, and the host's immune response is not able to escape from the cheese.) Tuberculosis is used. A variety of DNA samples were extracted and analyzed. The IS6110 gene is repeatedly arranged at the 3'end, the 5' end, and the outer extension. The PCR products were analyzed by electrokinetic analysis. The analysis of the symptoms of the disease is different from that of the same disease, and 9 cases of the same disease are different from that of the same disease The symptoms are different. In addition, 1 case of positive and 1 case of negative culture was detected, and the standard strain of tuberculosis could not be cultured. The results of the electromigration were compared, and the results of the electromigration were compared. Analysis of repeated alignment of the IS6110 gene, direct detection of possible, long-term culture, rapid detection of culture-negative cases, treatment of anti-tuberculosis, identification of different strains and investigation of epidemiology.