DNA損傷がエピジェネティックな変化を起こす機構

DNA 损伤导致表观遗传变化的机制

• 批准号: 06780433
• 负责人: 小村 潤一郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780433/
• 关键词: DNA損傷; DNAメチル化; 突然変異

DNA上のシトシンのメチル化と突然変異との関係、すなわち、自然突然変異率と誘発突然変異率に対するメチル化の存在の影響を調べるため、以下の実験を行った。SupF遺伝子を持つプラスミドpUB3に、メチル化、あるいは紫外線処理を行ったあと、突然変異を固定するための大腸菌(ER1821)および、検出するための大腸菌(Sy1032/pKY241)に順次導入し、SupF遺伝子における突然変異率を調べた。プラスミドのメチル化には、SssIメチラーゼを用い、すべてのCpG配列のシトシンを5-メチルシトシンにした(脊椎動物タイプのメチル化)。紫外線としては、254nmのものを300J/m^2照射した。ER1821は、メチル化されたDNAをrestrictionしない特殊なrecA^+株である。メチル化を施した場合、しなかった場合に比べ、突然変異率は約2倍に上昇した。これは、5-メチルシトシンでは脱アミノ化が起こりやすいことを反映しているものと考える。紫外線を照射することによって、突然変異率は約10倍に上昇した。メチル基がある場合とない場合の紫外線誘発突然変異率には、大きな差はみられなかった。TCG配列あるいはCGC配列の中央のCがメチル化されていると、紫外線による(6-4)photoproductの生成が抑えられるという議論もあるが、他の種類の損傷、他の配列での損傷の寄与が大きいため、この抑制が明らかにならなかった可能性がある。

DNA の シ ト シ ン の メ チ ル change と suddenly - different と の masato, す な わ ち, natural と 発 lure suddenly suddenly - different rate - rate of different に す seaborne る メ チ ル spheroidized の exist の を adjustable べ る た め, the following の be 験 を line っ た. SupF posthumous son 伝 を hold つ プ ラ ス ミ ド pUB3 に, メ チ ル, あ る い は line uv 処 reason を っ た あ と, suddenly - different を fixed す る た め の coliform (ER1821) お よ び, 検 す る た め の coliform (Sy1032 / pKY241) に progressive import し, SupF but 伝 に お け る を adjustable べ suddenly - different rate Youdaoplaceholder0. プ ラ ス ミ ド の メ チ ル change に は, SssI メ チ ラ ー ゼ を い, す べ て の CpG with column の シ ト シ ン を 5 - メ チ ル シ ト シ ン に し た (vertebrate タ イ プ の メ チ ル). Ultraviolet radiation と て て, 254nm <s:1> <s:1> を を and 300J/m^2 irradiate <s:1> た. ER1821 である, メチ された modified されたDNAをrestriction な special なrecA^+ strain である. メ チ ル change を shi し た occasions, し な か っ に た occasion than べ に は about 2 times, suddenly - different rate rise し た. こ れ は, 5 - メ チ ル シ ト シ ン で は ア off ミ ノ change since が こ り や す い こ と を reflect し て い る も の と exam え る. Ultraviolet を irradiation する とによって とによって, the sudden change rate <s:1> approximately tenfold に increases <s:1> た. The sudden variation rate of ultraviolet radiation induced by メチ がある base がある situation とな とな situation <s:1> に, large <s:1> な difference みられな みられな った. TCG match column あ る い は CGC match column の central の C が メ チ ル change さ れ て い る と, ultraviolet に よ る (6-4) photoproduct の generated が え suppression ら れ る と い う comment も あ る が, he の の injury, he の column で の damage の send with が き い た め, こ の inhibit が Ming ら か に な ら な か っ た possibility が あ る .

项目成果

小村潤一郎: "Repression of transient expression by DNA methylation in transcribed regions of reporter genes introduced into cultured human cells" Biochimica et Biophysica Acta. 1260. 73-78 (1995)

Junichiro Komura：“导入培养的人类细胞中的报告基因的转录区域中 DNA 甲基化对瞬时表达的抑制”Biochimica et Biophysicala Acta. 1260. 73-78 (1995)。