权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

DNA損傷が転写を抑制する機構

DNA损伤抑制转录的机制

基本信息

批准号：
05780392
负责人：
小村潤一郎
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780392/
关键词：
DNA損傷転写

项目摘要

発現ベクターに紫外線を照射して培養細胞に導入すると、遺伝子の発現が抑えられることが知られている。これは、遺伝子の転写ユニットに存在する損傷が、RNAの合成を途中で停止させるためと考えられている。この点をより詳細に明らかにするため、プラスミドの一部分にのみ紫外線で損傷を与え、これを培養細胞に導入する実験を行った。プラスミドとしては、pSV2catのCAT転写ユニット(SV40初期プロモーター+CAT遺伝子+SV40polyA)をpBluescript KS+に移したものを用いた。このプラスミドを制限酵素処理し、[ベクター+プロモーター](3.0+0.3kb)と[CAT遺伝子+polyA](1.6kb)のふたつの断片に分けた。各々の断片を254nmの紫外線で照射したのちライゲーションを行った。このDNAをリポフェクションでHeLa S3細胞に導入し、40時間後のCAT活性を測定した。500J/m^2の紫外線を[CAT+polyA]のみに照射した時には、CAT活性は約20%に低下し、[ベクター+プロモーター]のみに照射した時には約60%であった。なお、この線量をもとのプラスミド全体に照射した場合のCAT活性は、約10%であった。また、この線量でのピリミジン二重量の生成数は、3.4ESS/kbと見積っている。以上より、このプラスミドの転写の抑制の大部分は[CAT+polyA]上の損傷によるものであろうが、プロモーターやベクター部分の損傷も関与していると思われる。

The development of ultraviolet radiation in cultured cells and the inhibition of gene development There is damage to the RNA synthesis process, and the RNA synthesis process stops. This is the first time that a cell has been cultured. The pSV2cat CAT file (SV40 initial file +CAT file + SV40 polyA) is used in the pBluescript KS+ file. This restriction enzyme process is divided into two parts: [set-up + set-up](3.0+0.3kb) and [CAT gene +polyA](1.6kb). Each segment is irradiated with ultraviolet rays at 254nm. The CAT activity of HeLa S3 cells was measured 40 days after the introduction of DNA. CAT activity is about 20% lower when exposed to 500J/m^2 UV light and about 60% lower when exposed to 500J/m^2 UV light. The CAT activity in the case of total irradiation is about 10%. The number of weight generated is 3.4ESS/kb. Most of the inhibition of the above factors is related to the damage on the [CAT+polyA].