シコニン側鎖の水酸化およびエステル化に関わる酵素反応の研究

紫草素侧链羟基化和酯化酶反应的研究

• 批准号: 06780466
• 负责人: 矢崎 一史
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780466/
• 关键词: シコニン; デオキシシコニン; ムラサキ; 植物培養細胞; 水酸化反応; エステル化反応

Geranylhydroquinone以降のシコニン生合成中間体を検出するために、ユニバーサル・ラベルのフェニルアラニンを用いてトレーサー実験を行なった。シコニン生産培地M9にムラサキ培養細胞を移植し、^<14>C-標識フェニルアラニンを投与した。投与時期の詳細な検討により、M9培地移植後7日目にフェニルアラニンを投与した場合、放射活性のシコニン誘導体への取り込み率が最も高いと判明した。抽出した放射活性物質を分析した結果、未知の疎水性シコニン生合成中間体は検出されなかったが、シコニン側鎖に水酸基を有しないデオキシシコニンの速やかな生成と減少が観察された。またそれに伴ってアセチルシコニンなど各種シコニン誘導体の生成も認められ、デオキシシコニンが生合成中間体であることが示唆された。そこで、ムラサキ培養細胞に生産させた放射活性デオキシシコニンを、prep.TLCにて単離し、新たにムラサキ培養細胞に投与したところ、シコニンのエステル誘導体へ約20%もの効率で放射活性が取り込まれた。一方、シコニンの標識化合物も同様に調製、投与したが、こちらは全くそのエステル誘導体には変換されなかった。このことから、シコニン生合成の場とされる細胞内vesicleにおいて2種類の酵素系がマルチエンザイム・コンプレックスを形成しており、デオキシシコニン側鎖の水酸化、およびエステル化をシコニンの遊離を経ることなく行なっていると考えられた。そこでショ糖密度勾配遠心法により得たvesicleフラクションを用いて、Triton-Xの存在下、酵素実験を行なったところ、シコニンは全く基質として取り込まれなかったのに対し、デオキシシコニンはin vitro系でアセチルシコニンまで変換されることが示された。以上の結果よりシコニン誘導体側鎖の酸素原子はgeranylhydroquinoneが閉環し、ナフトキノン核が形成された後、最後に導入されることが明らかとなった。

In order to reduce the number of people in the process of synthesis, the Geranylhydroquinone is in the process of synthesizing. in the process of synthesis, the data is not available. This is the first time for students to learn that M9 will be transplanted, and that the ^ & lt;14>C- tag will not be used for transplantation. On the 7th day after the transplantation of M9 and M9, it was determined that the highest rate of radioactivity test was the highest, and the rate of radioactivity test was the highest. The results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis of the radioactive substances, the results of the analysis, the In the process of synthesis, all kinds of materials are used in the synthesis of raw materials, such as the production of raw materials, the production of various kinds of materials, and the production of synthetic materials. The radioactivity of the cells was measured by radioactivity assay, the radiation activity was measured by the radioactivity assay, the prep.TLC was isolated, the new cells were injected with the radioactivity by 20%, and the radioactivity was measured by the radioactivity assay. On the other hand, the identification compound is the same as that in the same way, and the whole body is in the same position. The enzymes involved in the synthesis of vesicle in the cell are known to be sensitive, sensitive, stable, low, low, low In the presence of vesicle, Triton-X, enzyme, glucose, glucose, The above results show that after the formation of the acid atoms, the geranylhydroquinone atoms and the nuclei, the final results are as follows: after the formation of the nuclei, the final results are as follows.

项目成果

Tomoyuki Okamoto: "Biosynthesis of shikonin derivatives from L-phenylalanine via deoxyshikonin in Lithospermum cell cultures and cell-free extracts." Phytochemistry. 38. 83-88 (1995)

Tomoyuki Okamoto：“在紫草细胞培养物和无细胞提取物中通过脱氧紫草素从 L-苯丙氨酸生物合成紫草素衍生物。”

Kazufumi Yazaki: "Intracellular localization of UDPG:p-hydroxybenzoate glucosyltransferase and its reaction product in Lithospermum cell cultures." Phytochemistry. 38(in press). (1995)

Kazufumi Yazaki：“UDPG：对羟基苯甲酸葡萄糖基转移酶及其反应产物在紫草细胞培养物中的细胞内定位。”