中心体の微小管形成能の調節機構に関する研究

中心体微管形成能力调控机制研究

• 批准号: 06780581
• 负责人: 鳥山 優
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780581/
• 关键词: 中心体; MTOG; MPF; アルカリ性ホスファターゼ; 酸性ホスファターゼ; 微小管形成能; リン酸化; 脱リン酸化

ウニ受精卵より分裂装置を単離し,そこから得られた中心体断片(MTOG)を微小管形成核として,その調節機構に関する研究を行った。MTOGにMPF(分裂中期促進因子)を作用させると,その構成タンパク質のリン酸化が起こり,微小管形成能が増加する。そのときリン酸化されるタンパク質は多種類あり,MPFの阻害剤やアルカリ性ホスファターゼで処理した試料の解析から,分子量7万のタンパク質がその基質として,リン酸化の状態と微小管形成能との間に相関関係があることがわかった。現在,そのタンパク質についてさらに調査している。一方,MTOGに対するホスファターゼの作用についても検討した。アルカリ性ホスファターゼはMTOGの微小管形成能を低下させるが,完全には消滅させない。酸性ホスファターゼも同様の効果を示した。また,両方のホスファターゼとも,MPFで上昇した中心体の微小管形成能を元のレベルにまで戻した。さらに,MTOG画分そのそのにもホスファターゼ活性が存在していた。MTOGに内在するホスファターゼ活性は,アルカリ性ホスファターゼの活性を阻害する40mMのβ-グリセロリン酸で阻害されなかった。しかし,β-グリセロリン酸は,保存中のMTOGの微小管形成能を低下させた。以上の結果は,先に行われている研究において示された,中心体の微小管形成能の調節が,構成タンパク質のリン酸化・脱リン酸化で行われているという推論を裏付けてはいるが,その調節様式は単純ではないことも示唆している。現在,ウニ卵の受精直後に細胞内で形成される中心体の無細胞系での再構成を試みているが,そこで形成された間期の中心体を材料として,今回行われた実験の再評価を計画している。

从受精的海胆卵中分离出裂变装置，并将从细胞核获得的中心体碎片（MTOG）用作微管形成核以研究其调节机制。在MTOG上激活MPF（中期启动子）会导致其成分蛋白的磷酸化，从而增加形成微管的能力。此时有许多类型的蛋白质被磷酸化，并且对用MPF抑制剂和碱性磷酸酶处理的样品进行分析表明，分子量为70,000的蛋白质是底物，并且磷酸化状态与微蛋白酶形成能力之间存在相关性。我们目前正在进一步研究蛋白质。另一方面，还研究了磷酸酶对MTOG的影响。碱性磷酸酶降低了MTOG的微管形成能力，但并未完全消失。酸性磷酸酶也表现出相似的作用。此外，两种磷酸酶都将Centrosome的微管形成能力恢复到MPF升高到其原始水平。此外，MTOG馏分还具有磷酸酶活性。 40mMβ-甘油磷酸盐抑制了MTOG固有的磷酸酶活性，这抑制了碱性磷酸酶的活性。但是，β-甘油磷酸盐降低了储存过程中MTOG的微管形成能力。上述结果支持了先前研究中表明的推断，即通过磷酸化和成分蛋白的磷酸化和去磷酸化进行了cent丝体的微管形成能力，但也表明调制模式并不简单。目前，我们正在尝试重新建立在无细胞系统中海胆卵受精后立即形成的细胞中的中心体，我们计划使用在那里形成的材料形成的相间中心体来重新评估当前的实验。