ニワトリ胚肢芽進行帯細胞に特異的なタンパク質に対する免疫学的な解析

鸡胚肢芽进展区细胞特异性蛋白质的免疫学分析

• 批准号: 06780604
• 负责人: 渡邉 明彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780604/
• 关键词: ニワトリ胚; 肢芽発生; 外胚葉性頂堤; 塩基性繊維芽細胞増殖因子; 進行帯

塩基性繊維芽細胞増殖因子(basic Fibroblast Growth Factor;bFGF)で処理をした肢芽進行帯中胚葉の初代培養細胞をホモジェナイズし、これを抗原としてマウスとウサギに免疫を行った。これらの動物から得られた抗血清を用いてウエスタンブロッティングを行ったところ、抗血清に含まれる抗体と結合する複数のタンパク質が抗原中に検出された。次に、bFGFで処理をしていない肢芽進行帯中胚葉の初代培養細胞を用いて抗血清の吸収処理を行った。この結果bFGF処理を行った細胞に特異的に見られる4種類のタンパク質を検出することに成功した。これらのタンパク質のおよその分子量はすべて97kDa以上であり、このうちの一つはその発現パターンからAV-1タンパク質であることがわかった。他の3つのタンパク質については未同定であり、未知の分子である可能性が考えられる。これらの分子を同定するためには抗体を用いた抗原の分析やそれらをコードする遺伝子の単離などが考えられるが、これらを行うためには、吸収操作を省略してより高い結合能を持つ抗体の作成が必要である。現在、これらの未同定の分子に対するモノクローナル抗体を作成中である。本研究によって検出されたタンパク質は、肢芽の発生において外胚葉性頂堤(Apical Ectoderm-al Ridge:AER)の作用によって発現が維持されるものであることが強く示唆される。AERは肢の骨のパターンを形成するために重要な領域の一つであり、今回の結果はAERの作用機構を解明するための重要な手がかりとなるものである。

Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) is used to treat the embryonic cells in primary culture. The animal was found to have an antiserum that was used to bind to the antigen. The primary culture cells of embryonic leaves were treated with bFGF and antiserum. The results showed that bFGF treatment was successful in cell specific detection of four kinds of protein. The molecular weight of this molecule is greater than 97 kDa, and the molecular weight of this molecule is greater than 97 kDa. He has three different kinds of molecules, which are different from each other. The molecular identity of the antibody is determined by the analysis of the antigen and the determination of the binding energy. Now, this is not the same molecule. This study was conducted to investigate the role of apodermic ridge (AER) in the development and maintenance of apodermic buds. AER's function mechanism is explained in detail.