種子休眠を失った突然変異系統の胚で消失したタンパク質のcDNAクローニング

失去种子休眠的突变株系胚胎中丢失蛋白质的 cDNA 克隆

• 批准号: 06740604
• 负责人: 川上 直人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740604/
• 关键词: コムギ; 種子; 休眠; cDNAクローニング; RT-PCR; 二次元電気泳動

強い休眠を持つ正常型のコムギ、北系1354の完熟種子胚から調製した可溶性タンパク質を二次元電気泳動法で展開し、非休眠突然変異系統で消失したタンパク質、ポリペプチドeを精製した。リジルエンドペプチダーゼによる限定分解で得られたポリペプチドeの断片、2種のN末端アミノ酸配列を、21および25残基決定した。アミノ酸配列の情報を基に縮重オリゴヌクレオチドプライマーを作成した。北系-1354の種子胚から調整した一本鎖cDNAを鋳型としたRT-PCR法により、約330bpの増幅断片を得た。このプライマーよりも10bp内側にあると予測される配列を基に第2のプライマーを作成し、1回目のPCR反応で増幅された断片を鋳型とした2回目のPCRを行ったところ、約10bp小さい断片が増幅された。得られたDNA断片をT-ベクターに組み込み、塩基配列をジデオキシ法決定したところ、目的とするポリペプトチドeのアミノ酸配列から推定される塩基配列とほぼ一致した。この増幅断片と相同性を持つ遺伝子を検索したが、有為な同性を持つ即知の遺伝子は見いだせなかった。増幅DNA断片をプローブとし、北系-1354種子胚のポリ(A)+RNAから作製したcDNAライブラリーをスクリーニングし、完全長と推定される8クローンを得た。これらの制限酵素地図を作成したところ、少なくとも3つのグループに分類できた。この8クローンを試験管内転写、翻訳によりタンパク質とし、二次元電気泳動で分離したところ、ポリペプチドeと同一の移動度を示す1クローンを見いだした。ポリペプチドeの完全長cDNAの単離に成功したため、現在、このcDNAの全塩基配列の決定を行っている。

The mature seed embryo of strong dormancy and normal dormancy is modulated, soluble and soluble, and the secondary electrokinetic method is developed. The non-dormancy sudden change system is disappeared, soluble and soluble. The restriction analysis was performed on the fragments of the two N-terminal amino acid residues, 21 and 25. The information on the acid sequence is abbreviated as " A cDNA fragment of approximately 330 bp was obtained from the seed embryo of Beixi-1354 by RT-PCR and amplification. 10 bp in length, 10 bp in length DNA fragments were identified by T-test, DNA base alignment was determined by T-test, DNA base alignment was estimated by T-test, DNA base alignment was determined by T-test. This is the first time that we've seen the same thing. DNA fragment amplification (A)+ RNA amplification (A)+ cDNA amplification (B)+ RNA amplification (C)+ DNA amplification (A)+ RNA amplification (A)+ RNA amplification ( This restriction enzyme is made into a variety of enzymes. The 8-dimensional test tube is composed of the following parts: the first part is composed of the first part, the second part is composed of the second part, the third part is composed of the third part, the fourth part is composed of the fourth part, and the fourth part is composed of the fourth part. The complete cDNA sequence was successfully separated from the target cDNA sequence.