無尾両生類の下垂体神経葉ホルモン受容体遺伝子の解析

无尾两栖类垂体神经小叶激素受体基因分析

• 批准号: 06740618
• 负责人: 兵藤 晋
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06740618/
• 关键词: 神経葉ホルモン; バソトシン; 受容体; 無尾両生類; cDNAクローニング; 体液浸透圧; 体液量; 変態

前年度までの研究から、下垂体神経葉ホルモンのバソトシン(VT)が、無尾両生類の体液浸透圧および体液量の調節に重要であること、また個体発生の過程においては、変態にともなう陸上への進出に重要な役割を果たすことが示唆されてきた。本研究では、無尾両生類におけるVTの役割を明らかにするため、VT受容体の発現の変動を調べることを目的として、VT受容体cDNAのクローニングを行った。まず、哺乳類のデーターをもとに、RT-PCR法により部分的なクローンを得ることを試みた。ウシガエルとヒキガエルの腎臓および膀胱からmRNAを抽出し・精製し、cDNAを合成した。神経葉ホルモン受容体は、膜7回貫通型の受容体ファミリーに属する。その構造において、膜貫通部分やホルモン結合部位と予想される部分は、神経葉ホルモン受容体ファミリーの間で比較的保存性が高いと考えられる。そこで、これらの領域に対するdegenerateプライマーを作成し、PCRに用いた。RT-PCRを行った結果、ウシガエルとヒキガエルの両方で、水・電解質代謝の調節に関わると考えられるV-2型受容体cDNAクローンが得られた。ヒキガエルでは、もう一つの神経葉ホルモンであるメソトシンの受容体cDNAクローンも得られた。現在、cDNAライブラリーを作成し、全長の解析を行っている。ノーザン解析を行ったところ、V-2型受容体は、膀胱や腎臓といった浸透圧調節器官で特異的に発現していることがわかつた。一方、哺乳類において血圧などの調節に関わるV-1型受容体cDNAのクローン化も、肝臓のmRNAを用いて試みているが、まだ成功していない。哺乳類以外でV-2型受容体遺伝子のクローン化に成功したのは、本研究が始めてである。今後は、得られたcDNAクローンを用い、ホルモン遺伝子の発現とともに受容体遺伝子の発現の変動を解析していく。

Before the annual ま で の research か ら, pituitary god 経 leaf ホ ル モ ン の バ ソ ト シ ン が (VT), one that struck raw class の fluid saturated 圧 お よ び fluid volume adjust の に important で あ る こ と, ま た individuals born 発 の process に お い て は, - に と も な う onshore へ の cut in and out of the important な に service を fruit た す こ と が in stopping さ れ て き た. This study で は, koala struck raw に お け る VT の "を cut Ming ら か に す る た め, VT, let body の 発 is の - motion を べ る こ と を purpose と し て, VT, let body cDNA の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. ま ず, mammals の デ ー タ ー を も と に, rt-pcr method に よ り part of な ク ロ ー ン を have る こ と を try み た. Youdaoplaceholder0 とヒキガエ とヒキガエ とヒキガエ とヒキガエ <s:1> <s:1> および bladder ら らmRNAを extraction of <s:1>, refinement of <s:1>, cDNAを synthesis of た た. The Shinkinki leaf ホ モ モ モ <s:1> receptor and the membrane 7-cycle penetrating type <s:1> receptor ファ リ に に belong to する. そ の tectonic に お い て, transmembrane part や ホ ル モ ン combining site と to think さ れ る part は, god 経 leaf ホ ル モ ン by let body フ ァ ミ リ ー の で comparison between the preservation of sexual が high い と exam え ら れ る. そ こ で, こ れ ら の field に す seaborne る degenerate プ ラ イ マ ー を made し, PCR に い た. Rt-pcr を line っ た results, ウ シ ガ エ ル と ヒ キ ガ エ ル の の struck で, water, electrolyte metabolism regulating に masato わ る と exam え ら れ る V - type 2 by the capacity of body cDNA ク ロ ー ン が must ら れ た. Youdaoplaceholder0 ヒキガエ で で で で, ヒキガエ う - ホ <s:1> Shinto leaf ホ ホ モ であるメソトシ であるメソトシ であるメソトシ であるメソトシ cDNA of the <s:1> recipient of the receptor ロ ロ う られた られた られた. Now, cDNAラ ラ ブラリ ラ を を を を is made to ラ, full-length <s:1> is resolved to を lines って る る る. Line analytical を ノ ー ザ ン っ た と こ ろ, V - type 2 let body は や kidney and bladder perforatien と い っ た soak 圧 で specific regulating organs に 発 now し て い る こ と が わ か つ た. Party, mammals に お い て blood 圧 な ど の adjust に masato わ る V - type 1 by let body cDNA の ク ロ ー ン も, a routine liver の mRNA を with い て try み て い る が, ま だ successful し て い な い. In addition to mammals, the 伝 offspring of でV-2 receptor type 伝 <s:1> ロ ロ ロ ロ were successfully esterified に, た た,, and in this study, が began めてである. Future は, ら れ た cDNA ク ロ ー ン を い, ホ ル モ ン heritage 伝 son の 発 now と と も に by let body heritage 伝 son の 発 の now - dynamic analytical し を て い く.

项目成果

R.S.Nishioka: "Localization of mRNAs for a pair of prolactins and growth hormone in the tilapia pituitary using in situ hybridization." General and Comparative Endocrinology. 89. 72-81 (1993)

R.S.Nishioka：“利用原位杂交对罗非鱼垂体中一对催乳素和生长激素的 mRNA 进行定位。”

Masafumi Amano: "Activation of salmon gonadotropin-releasing hormone synthesis by methyltestosterone administration in yearling masu salmon." General and Comparative Endocrinology. 95. 347-380 (1994)

Masafumi Amano：“在一岁马苏鲑鱼中施用甲基睾酮激活鲑鱼促性腺激素释放激素的合成。”

Susumu Hyodo: "Expression of vasotocin gene during metamorphosis in the bullfrog hypothalamus." Zoological Science. 11(Sup). 9- (1994)

Susumu Hyodo：“牛蛙下丘脑变态过程中催产素基因的表达。”