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ウシ乳線組織培養における上皮小体ホルモン関連タンパクの分泌

牛乳腺组织培养中甲状旁腺激素相关蛋白的分泌

基本信息

批准号：
06760286
负责人：
岡田洋之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Rakuno Gakuen University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

上皮小体ホルモン関連タンパク(PTHrP)は悪性腫瘍のみならず、皮膚、胎盤、平滑筋、泌乳期乳腺など正常各組織ににおいてその局在が報告され、PTH様作用以外に胎子期の細胞の分化と増殖を調整しているものと考えられている。本研究では、泌乳期のホルスタイン乳牛の乳腺細胞をコラーゲン・ゲル上で培養し、培養乳腺細胞がPTHrPを産生・分泌するかを明らかにする目的で行われた。乳腺細胞は培養24時間以内にゴラ-ゲン膜上に付着し、4〜6日目にシート状に充満した。培養6日目に2.5mm厚のコラーゲン・ゲルをプレートより剥離したところ、剥離1〜4時間で収縮が明らかとなり、剥離後24時間でその直径は1/3に減じた。組織学的には収縮コラーゲン・ゲル上の上皮細胞は円柱状あるいは立方状を呈していた。免疫組織化学的に乳腺上皮細胞はPTHrP、サイトケラチン、ケラチンの各抗体に強陽性に染まった。PTHrP産生は培養2日目では低値(<0.5ng/ml)であったが培養6〜8日目に最高値(2-4ng/ml)に達し、培養14日目までほぼ一定の値で推移した。培養液中の免疫活性PTHrPと生物活性PTHrPは良く相関していた。PTHrP産生は2.5mm厚の浮遊コラーゲン培養の方が1.0mm厚の固定コラーゲン培養法より高い傾向にあったが有為差は認められなかった。またラクトフェリン産生は高値(500-3,000ng/ml)で、αs1-カゼインは低値(<14-77ng/ml)で推移した。PTHrP産生はプロラクチンにより培養6〜14日まで約50%刺激された。またEGF(10ng/ml)添加によりPTHrP産生は、2日間でほぼ2倍に増加した。今回の研究成績より泌乳期の乳牛由来の初代培養乳腺細胞は、細胞培養下でPTHrPを分泌・産生していることが、またその産生はコラーゲン支持膜の厚さおよび収縮により影響されないが、成長因子や乳汁分泌を促進させるホルモンにより調整されていることが明らかとなった。

Epithelioma associated with PTHrP is reported in various tissues including skin, placenta, smooth muscle and lactating mammary gland, and is regulated in differentiation and proliferation of fetal cells in addition to PTH. The purpose of this study is to clarify the production and secretion of PTHrP in cultured mammary cells of dairy cows during lactation. Mammary gland cells were cultured for 24 days, 4 to 6 days and then fully cultured. 6 days after incubation, the diameter of the 2.5 mm thick tube was reduced by 1/3 of the diameter after 1 ~ 4 days of peeling. Histologically, the epithelial cells are columnar and cubic. Immunohistochemical staining of breast epithelial cells was strongly positive for PTHrP, PTHrP production decreased from a low value (<0.5ng/ml) to a maximum value (2-4ng/ml) from day 6 to day 8 of culture, and increased to a certain value from day 14 of culture. The immune activity PTHrP in culture medium is closely related to the biological activity PTHrP. PTHrP production is 2.5mm thick and the culture method is 1.0mm thick and the culture method is fixed.αs1-αs1-α s2-α s3-αs1-α s2-α s2-α s3-α s2-α s3-α s4-α s3-α s4-α s5-α s6-α s6-α s7-α s6-α s7-α s8-α s9-α s9-α s PTHrP produces about 50% stimulation after 6 ~ 14 days of culture. EGF(10ng/ml) was added to increase PTHrP production by 2 times during the day. The results of this study indicate that the secretion and production of PTHrP in primary cultured mammary cells of lactating cows in cell culture are affected by the thickness and contraction of supporting membrane, growth factors and milk secretion.