α-アクチニンのCa^<2+>感受性に及ぼすPIP_2の作用の解析

PIP_2对α-辅肌动蛋白Ca^2+敏感性的影响分析

• 批准号: 06770078
• 负责人: 今村 道博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770078/
• 关键词: α-アクチニン; 血管内皮細胞; PIP_2; アクチン

アクチン系細胞骨格の構成蛋白質であるα-アクチニンは筋細胞中に発現する筋型と筋以外の組織に発現する非筋型の2種類に大別される。非筋型α-アクチニンのアクチン結合はカルシウムにより調節されるが、これはさらにそのカルシウム感受性の違いにより線維芽細胞型と肺型に分類される。肺型の発現は主に血管内皮細胞に認められるが、その精製標品にはフォスファチジルイノシトール二リン酸(PIP_2)が強く結合していることが明らかになった。このPIP_2結合性が肺型分子種に特異的であるかどうかという問題を明らかにするために、肺型および線維芽細胞型α-アクチニンcDNAを大腸菌内で発現、精製し、大腸菌由来のPIP_2がこれらのリコンビナント分子に結合してくるか否かを解析した。その結果、肺型分子のみにPIP_2が強く結合していることが示された。さらに、界面活性剤を用いた精製方法によりこのPIP_2非結合型の肺型α-アクチニンを単離することを試みたが0.1%TritonX-100存在下においてもPIP_2の結合に変化は認められなかった。そこで培養血管内皮細胞を材料として肺型α-アクチニンの粗精製分画を得た後、抗PIP_2抗体を用いて、これにPIP_2が結合しているか否かを解析したが、この方法によって得られた肺型α-アクチニンからはPIP_2が検出されなかった。また、この分画を用いてアクチン結合におけるカルシウム感受性を解析したところ、そのアクチン結合性は1 mMのCaCl_2によって著しく抑制されることが示された。これらの結果は肺型α-アクチニンにはPIP_2を結合する特異的な一次構造が存在すること、そしてその構造へのPIP_2の結合を調節する機構が内皮細胞に存在することを示唆していた。さらに、PIP_2は肺型α-アクチニン分子と結合することによって、そのアクチン結合におけるカルシウム感受性を変化させる可能性を示唆していた。

The protein that constitutes the cellular skeleton is found in muscle cells and in tissues other than muscle cells. Non-muscle α-cell type and lung type are classified according to the sensitivity of the receptor. The development of lung cancer is mainly related to vascular endothelial cells, and the refined standard is related to the strong binding of PIP_2. The binding of PIP_2 to lung type molecular species is specific. The binding of PIP_2 to lung type molecular species is As a result, PIP_2 is strongly bound to the lung molecule. In the presence of 0.1% Triton X-100, the binding of PIP_2 was studied. After the crude purification of cultured vascular endothelial cells, the anti-PIP_2 antibody was used to analyze the protein binding to PIP_2. The sensitivity analysis of CaCl_2 binding to 1 mM CaCl_2 was performed to determine whether CaCl_2 binding to CaCl_2 was inhibited by CaCl_2. The results showed that there was a specific primary structure in the lung type α-cell, and there was a regulatory mechanism in the structure of PIP_2. In addition, PIP_2 has demonstrated the possibility of changing the sensitivity of lung α-receptor binding.

项目成果

M.Imamura: "Identification of 115-kDa protein from muscle tissues:expression of a novel nonmuscle α-actinin in vascular endothelial cells." Exp.Cell Res.211. 380-390 (1994)

M.Imamura：“肌肉组织中 115 kDa 蛋白质的鉴定：血管内皮细胞中新型非肌肉 α-肌动蛋白的表达。”Exp.Cell Res.211（1994）。

M.Imamura: "Molecular Cloning of Low Ca^<2+>-sensitive-type Nonmuscle α-Actinin." Eur.J.Biochem.223. 395-401 (1994)

M.Imamura：“低Ca^2+-敏感型非肌肉α-肌动蛋白的分子克隆。Eur.J.Biochem.223（1994）”