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炎症巣の白血球におけるプロスタグランジンH合成酵素の誘導とその機序

炎症灶白细胞前列腺素H合酶的诱导及其机制

基本信息

批准号：
06770071
负责人：
畑中公
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.好中球、単球におけるPGHS-2のin vitroでの誘導:雄性SD系ラット(9-10週令)未処置個体の末梢血単核球、未処置個体の胸腔洗浄液細胞、およびカラゲニン胸膜炎19時間胸水中の好中球と単核球を直径6cmのプラスティックシャーレ1枚当り2.5×10^7細胞/2ml培養液(RPMI-1640)で蒔いて、37℃で3時間培養し、PGHS-2を発現する条件を検討した。検討条件は、培養液中の血清(10%FCS,10%rat serum,血清なし)、シャーレ表面のコーティング(collagen,fibronectin,gellatin,なし)、及び炎症性メディエーター等(IL-1β,IL-8,MCP-1,LTB_4,C5a,bradykinin,PGI_2 derivative,TNFα,PMA,carrageenin etc.)の組合せである。結果を以下にまとめる。(1)シャーレ表面のコーティングはPGHS-2の発現に影響しない。(2)19時間胸水中の単核球は無血清培養で、PMA,carrageeninによりPGHS-2を強く発現した。(3)19時間胸水中の好中球でも無血清でPMA,carrageeninがPGHS-2を強く発現させた。(4)未処置個体の胸腔洗浄液細胞は10%FCS存在下でPMAによりPGHS-2の発現がみられた。他のメディエーターの効果は検討中である。(5)未処置個体の末梢血単核球は検討したあらゆる条件下でPGHS-2の発現が認められなかった。(6)検討した全ての細胞、条件でPGHS-1の発現はほぼ一定であった。2.好中球、単球におけるPGHS-2のin vivoでの誘導:カラゲニン胸膜炎5時間胸水中の白血球でWestern blottingにより70kdのPGHS-1,PGHS-2を検出した。PGHS-1の発現量は起炎前から起炎後19時間までほぼ一定であったが、PGHS-2は起炎後3-7時間に最も強く発現し、これは胸水中のPG類の時間変化と一致した。Northern blottingの結果、5時間胸水中の白血球から2.9kbのPGHS-1 mRNAと4.9kbのPGHS-2 mRNAが検出された。なお、in situ hybridizationは再現性のある結果が得られず、組織の固定法、probeの洗浄法の改良が今後の課題として残った。

1. Good hit ball, 単 ball におけるPGHS-2 <s:1> in Vitro での induction: male SD ラット (9-10 weeks to) not 処 buy individual 単の peripheral blood nuclear ball, not 処の pleural fluid at individual cells, およびカラゲニン pleurisy の good time chest water of 19 ball と単 nuclear を ball diameter 6 cm のプラスティックシャーレ one when り 2.5 * 10 ^ 7 cells / 2 ml culture (R PMI-1640)で shi てて, 37 ° c で3 time for culture, PGHS-2を occurrence する conditions を検 discuss た. Youdaoplaceholder0 ask for conditions 検, in the culture medium, <s:1> serum (10%FCS,10%rat) Serum, serum なし), シャーレ surface のコーティング (collagen and fibronectin, gellatin なし), and inflammatory メびディエーター etc (IL - 1 beta, IL - 8, MCP - 1, LTB_4, C5a, bradykinin, PGI_2 derivative,TNFα,PMA,carrageenin, etc. <s:1> combination せである. The result is を as follows にまとめる. (1) The surface of シャシャレレ has a にコティティ <s:1> グググに PGHS-2 に, which has a に influence on ななな. (2) At 19 time, the <s:1> 単 nuclear spheres in the pleural effusion were serum-free cultured in で, PMA,carrageeninによ <s:1> PGHS-2を, and the strong く occurrence of た. (3) In the pleural effusion at 19 times, there is a <s:1> good middle ball でで without serum でPMA,carrageeninがPGHS-2を strong く appearance させた. (4) In the presence of <s:1> 10%FCS in the <s:1> pleural lavage fluid cells of the untreated individual, でPMAによ <s:1> PGHS-2 is present がみられた. He <s:1> メディエタタ検である results in 検検である. (5) In cases where the peripheral blood of an individual is not treated, the 単 nuclear globules are 検 and 検 are treated, でPGHS-2 samples are found to be が and められなったった. (6)検 to obtain た to complete て <s:1> cells, conditions でPGHS-1 <s:1> to present であったほぼ to a certain であった. 2. Good mesenchymal and 単 mesenchymal におけるPGHS-2 <s:1> in vivoで <s:1> induction :カラゲニ <s:1> pleurisy for 5 time, white blood cells in pleural effusion でWestern blottingによ <s:1> 70kd <e:1> PGHS-1,PGHS-2を検た. PGHS - 1 の発 now quantity before は up inflammation から 19 inflammation after time までほぼ certain であったが, PGHS - 2 は inflammation after 3 to 7 time に most strong もく発し, これは chest water の PG の time variations change とし uniformly た. The <s:1> results of Northern blotting, 5 hours of white blood cells in pleural effusion ら2.9kb of PGHS-1 mRNAと4.9kb of PGHS-2 mRNAが検された. The results of なお, in situ hybridization なお reproducibility <s:1> あるが obtained られず, tissue <s:1> fixation method, probe <s:1> cleaning method <s:1> improvement が future <s:1> topics と, てて and った.