PCR-RFLP法による恙虫病リケッチアのDNA型別と病原性の関連
PCR-RFLP法研究立克次体DNA分型与致病性关系
基本信息
- 批准号:06770340
- 负责人:
- 金额:$ 0.51万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1994
- 资助国家:日本
- 起止时间:1994 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
[目的]PCR法とrestriction fragment length polymorphysm(RFLP)法を組み合わせることによりR.tsutsugamushiのDNA型別を行い、病原性との関連を検討する。[材料と方法]BS-C-1細胞で継代培養したR.tsutsugamushiの標準3株(Gilliam、Karp、Kato)および入江、平野株。患者末梢血は1990〜1994年度に宮崎地方で発生した恙虫病患者17例よりヘパリン採血し単核球を分離した。培養株および分離した単核球より常法にてDNAを抽出しnested法にてPCRを行った。産物をHhaIなど10種類の制限酵素で処理し、アガロースゲル電気泳動し、そのパターンによってDNA型別に分類した。[結果]1)RFLP法によるR.tsutsugamushiの型別:標準3株および入江、平野株を増幅し産物をHhaI処理した場合、泳動パターンにより各株の鑑別が可能であった。2)患者末梢血よりのリケッチアDNAの検出とその型別:患者17例中14例で末梢血単核球よりPCR法にてリケッチアDNAが検出可能であった。産物をHhaIで処理したところ10例が入江株、4例が平野株と同一のパターンを示した。14例全例が蛍光抗体法による血清型と一致した。HhaIにて平野株と同じパターンを示した4例中2例はHinfI、AluI処理にて平野株と異なるパターンを示した。この2例よりリケッチアを分離しマウスに対する病原性を検討したところ平野株より弱毒であった。[結論]本法ではPCRにて増幅した産物をHhaI処理することで分離株だけでなく患者末梢血よりリケッチアを分離することなく血清型の鑑別が可能であった。さらにHinfI、AluI処理することで検討した5株以外のDNA型のリケッチアの同定が可能であった。現在さらに検体を増やしてDNA型を検討するとともに、検討した5株と異なるDNA型を示す株の免疫学的性状を検討中である。
[objective] PCR method と restriction fragment length polymorphysm (RFLP) method を group み close わ せ る こ と に よ り R.t sutsugamushi の DNA type line don't を い, pathogenicity と の masato even を beg す 検 る. [material と method]BS-C-1 cell で継 subculture た r. tsutsugamushi <s:1> standard 3 strains (Gilliam, Karp, Kato)および Inoue, Hirano strains. From 1990 to 1994, 17 patients with た scrub typhus in the に miyazaki area で had their peripheral blood collected よ 単 nuclear globules を isolated た. The culture strain および isolation of the nucleus globs よ た単 conventional method にてDNAを extraction <s:1> nested method にてPCRを rows った. Product を HhaI な ど 10 kinds limitations の enzyme で 処 し, ア ガ ロ ー ス ゲ ル 気 swimming し, そ の パ タ ー ン に よ っ て DNA type don't に classification し た. [results] 1) RFLP method に よ る R.t sutsugamushi の type don't: standard 3 strains お よ び into the river, Mr. Hirano を raised し product picture を HhaI 処 Richard し た occasions, swimming パ タ ー ン に よ り each plant の may identify が で あ っ た. 2) in patients with peripheral blood よ り の リ ケ ッ チ ア DNA の 検 out と そ の type don't: 17 cases of 14 patients with 単 で peripheral blood nuclear ball よ り PCR method に て リ ケ ッ チ ア DNA が 検 makes possible で あ っ た. Product を HhaI で 処 Richard し た と こ ろ 10 cases が into jiang strains, 4 cases が hirano strains と same の パ タ ー ン を shown し た. The による serotypes of all 14 cases were と consistent by が蛍 light antibody method and た た. HhaI に て hirano と strains with じ パ タ ー ン を shown し た 4 cases, 2 cases of は HinfI, AluI 処 Richard に て hirano と different strains な る パ タ ー ン を shown し た. 2 こ の よ り リ ケ ッ チ ア を separation し マ ウ ス に す seaborne る pathogenicity を beg し 検 た と こ ろ hirano strains よ り weak poison で あ っ た. . [conclusion] this law で は PCR に て rights of し た product を HhaI 処 Richard す る こ と で isolates だ け で な く peripheral blood in patients with よ り リ ケ ッ チ ア を separation す る こ と な く serotype の may identify が で あ っ た. さ ら に HinfI, AluI 処 Richard す る こ と で beg し 検 た 5 strains outside の DNA type の リ ケ ッ チ ア の with fixed が may で あ っ た. Now さ ら に 検 body を raised や し て DNA type を beg す 検 る と と も に, beg し 検 た 5 strains と different な る DNA type を す の strains in immunological properties を 検 beg in で あ る.
项目成果
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