せん断応力を受けた培養内皮細胞が示すF-アクチンフィラメントの動的反応過程の解析
培养内皮细胞剪切应力下F-肌动蛋白丝的动态反应过程分析
基本信息
- 批准号:06770478
- 负责人:
- 金额:$ 0.58万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1994
- 资助国家:日本
- 起止时间:1994 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ウシ大動脈由来の血管内皮細胞をカバーガラス上に培養し、顕微鏡下でコンフル-エントになったことを確認した後、まず、細胞に色素を取り込ませる穴をあけるため、サポニン処理(0.5mg/mlの濃度でハンクス平衡塩類溶液に溶解した)を20分間施した。その後、150nMの濃度のロ-ダミンファロイジンに20分間浸し、細胞が生きたままの状態でアクチンフィラメントを染色した。この細胞を平行平板型フローチャンバにセットし、蛍光顕微鏡で観察を行いながら、2Paの定常的なせん断応力を負荷した。平行平板型フローチャンバには、10%牛胎児血清と蛍光色素の褪色防止剤であるn-プロピルガレート(0.01g/ml)を混ぜたダルベッコ改変イ-グルメディウムを灌流させた。観察と同時に高感度ビデオカメラで撮影を行い、ビデオテープに映像を記録した。1時間にわたって実験を行った結果、一部のアクチンフィラメントが徐々に成長する様子が観察されたが、流れの方向への配向などは観察されなかった。サボニン処理により、細胞を固定化せずにアクチンフィラメントを染色し、せん断応力を受けた血管内皮細胞のアクチンフィラメントの動的な反応過程の解析が可能であることは確認できた。しかし、蛍光色素であるロ-ダミンファロイジンが蛍光顕微鏡で観察中に褪色してしまい、長時間にわたった観察が不可能であるため、今後、高感度ビデオカメラをとおした映像の記録方法などを改善し、アクチンフィラメントの動的な反応過程を詳細に観察する予定である。
The vascular endothelial cells derived from the aorta were cultured on a microscope-based culture medium, and the cytochromes were extracted from the culture medium. The cytochromes were dissolved in a balanced solution at a concentration of 0.5 mg/ml and applied at intervals of 20 minutes. After the treatment, the concentration of 150nM was reduced to 20 minutes, and the cells were stained. These cells are parallel to the plate type and are observed by a microscope under constant load of 2Pa. Parallel plate type: 10% fetal bovine serum, pigment fading prevention agent (0.01g/ml), mixed solution (0.01g/ml), perfusion agent (0.01g/ml) Check the high sensitivity of the image. 1. The direction of the flow is different. It is possible to analyze the reverse reaction process of vascular endothelial cells under the influence of different treatment conditions and cell immobilization conditions. The method of recording images with high sensitivity is to improve the quality of the images and to observe the dynamic reflection process in detail.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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