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強タンパク親和性薬物の定量的結合解析法の開発とその応用

强蛋白亲和力药物定量结合分析方法的建立及其应用

基本信息

批准号：
06857170
负责人：
澁川明正
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

タンパク結合は薬物の薬理効果の発現や体内動態に大きく影響する。安全で効果的な薬物の開発を推進する上で、タンパク結合の研究は不可欠である。ところが、タンパク質との親和性が強い薬物の場合、低レベルの非結合型薬物濃度を精度良く定量することは困難であった。私はこの問題点を解決するために、我々が既に開発した高性能先端分析(HPFA)法を利用して、強タンパク親和性薬物の非結合型濃度を簡便に定量できるオンラインHPLC分析法を開発した。代表的な血漿タンパクであるアルブミンと抗糖尿病薬であるtroglitazone(CS-045)又はキサンチンオキシダーゼ阻害薬であるBOF-4272の混合溶液を試料に用いた。今回作成したHPLCシステムは、HPFA分析用ジオールシリカカラム、前濃縮カラム、並びに分析用HPLCカラムを2つのスイッチングバルブで連結したものである。混合試料をHPFAカラムに直接注入すると、先端分析の原理に基づいて非結合型薬物がプラトー部分を有する台形状ピークとして溶出された。このプラトー部分の一定量をheart-cutして前濃縮カラムに送った後、溶出力の強い分析用移動相を流して濃縮された非結合型薬物を分析カラムに送った。この時得られたピーク面積から濃縮された非結合型薬物量が求まり、heart-cutしたプラトー体積で除することにより試料中の非結合型濃度が求まった。BOF-4272については光学分離カラムを用いることにより光学異性体ごとに非結合型濃度を測定することができた。また、本法はヒト血漿中非結合型CS-045濃度測定に適用できた。いずれの薬物も99%以上の結合率を示したが、低濃度(数百pM〜数nM)の非結合型濃度を通常のUV検出器を用いて再現性良く(CV<10%)定量できた。また、BOF-4272とアルブミンとの結合は立体選択的であり、かつ動物種(ヒト、ウシ、ラット)により異なることが判明した。

It combines the physical effects of the ingredients and the effects of the physical effects on the body to create a large impact on the dynamics within the body. It is important to promote the research on the development of safe and effective medicines and the combination of them. In the case of high affinity and high affinity of ところが and タンパク, the concentration of low レベルのnon-binding substance is good and the accuracy is good, so it is difficult to quantify the substance. The private problem is solved and I am using the high-performance front-end analysis (HPFA) method. , the non-binding concentration of strong affinity compounds can be easily and quantitatively analyzed using HPLC analysis method. Representative of the anti-diabetic anti-diabetic troglitazone (CS- 045) Also use the mixed solution of BOF-4272 as a sample. This time, we will create a HPLC filter, a filter for HPFA analysis, and a pre-concentrated filter The HPLC カラムを2つのスイッチングバルブで合したものである was used for analysis. The mixed sample is directly injected into the HPFA sample, and the principle of advanced analysis is based on the principle of non-binding type substance. The part of the compound has a platform shape and is dissolved out.このプラトーPart of のa certain amount of をheart-cut して before concentrated カラムに Send った after, dissolve The output of strong analytical mobile phase flow is concentrated and non-binding substances are analyzed and sent to the laboratory.この时得られたピークareaからcondensationされたunbinding type 薬quantityが看まり、heart -Cut the volume and remove the non-binding type concentration in the sample. BOF-4272 is used to measure the non-binding type concentration of optically heterophilic non-binding type of optically separated fluorocarbon. This method is applicable to the determination of the concentration of unbound CS-045 in plasma. The binding rate of 99% or more of this product is demonstrated, and the non-binding concentration of low concentration (hundreds of pM~several nM) is usually used in UV emitters with good reproducibility (CV<10%) and quantitative measurement.また, BOF-4272 and とアルブミンとの, であり which combines the three-dimensional selection , かつ animal species (ヒト, ウシ, ラット) によりdifferent なることが明明した.