ウリカーゼ遺伝子cAMP応答領域に結合する新たな転写調節因子のクローニング

克隆与尿酸酶基因的 cAMP 反应区结合的新转录调节因子

• 批准号: 06858066
• 负责人: 田中 美加
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06858066/
• 关键词: ウリカーゼ; 転写調節; cAMP応答性

前年度までの実験結果から得られたウリカーゼ遺伝子のcAMP応答領域は、400bpという長い範囲にわたっており、蛋白質結合領域との機能的な関連づけが不明瞭であった。そこで、cAMP応答領域をより短い範囲に限定するため、新たに数種類のCATレポータープラスミドを作製し、CATアッセイを行った。その結果-169から-86の84bpがcAMP応答性に関与していることが明らかになった。さらに、この84bpを、既に蛋白質の結合が確認できている上流側の30bp(-169から-140)と、それ以外の下流側の大部分をカバーする61bpの制限酵素断片(-155から-95)にわけ、それぞれをプローブにゲルシフトアッセイを行った。結果として、61bp断片には蛋白質は結合しないことがわかった。これらの実験結果からウリカーゼ遺伝子のcAMPによる転写促進には-169から-140の30bpが関わっていることを、より明確に示すことができた。(第67回日本生化学会大会にて発表)。この30bpに結合する転写調節因子の遺伝子をクローニングするためには、蛋白質結合のコアになっている領域を決定する必要がある。また、結合蛋白質が既知のCREB(cAMP response element binding protein)とは異なることを確認しておくことも必要である。実験計画に基づき、DNaseIフットプリントを行ったが、有効な結果が得られなかった。そこで、数種類の欠失プローブを作製してゲルシフトアッセイを行い、コア領域の決定を試みた。その結果、-164から-155(GAAAAATGTC)の領域がコアになっていることがわかった。次に、実験計画に基づき、CREB抗体を用いたゲルシフトアッセイを行ったが、市販の抗体はポリクローナルであるため、有効な結果は得られなかった。しかし、CRE配列とCREBとのコンプレックスは、30bpと未知蛋白質とのコンプレックスとは異なる位置にシフトすることがわかり、30bpに結合する蛋白質が未知の物であることが、より強く示唆された。以上の結果をまとめ、現在投稿中である。

The results of the previous year showed that the cAMP response domain of the protein binding domain was 400bp long and the functional relationship between the protein binding domain and the cAMP response domain was unknown. For example, if you want to change the content of a file, you can change the content of the file. The result is-169-86 84 bp and cAMP response is related to the expression of cAMP. In addition, the binding of the 84bp protein was confirmed. The upstream 30bp fragment (-169 to-140) and most of the downstream 61bp restriction enzyme fragment (-155 to-95) were identified. Results: 61bp protein binding The results of this study show that the cAMP of the gene is promoted by-169,-140,-30bp and is clearly indicated. (The 67th Japan Biochemical Society Conference). The 30bp binding domain determines the binding domain of the regulatory factor gene. CREB(cAMP response element binding protein) is a known protein that binds to a protein. The plan is based on the design, design and implementation of the project, and the results are available. In addition, the number of categories of missing persons is controlled by the decision of the number of missing persons. As a result, the field of-164-155(GAAAAATGTC) is. In the second half of the year, the base of the project, CREB antibody was used in the middle of the project, and the market was used in the middle of the project. CRE alignment and CREB protein binding are unknown, 30bp protein binding is unknown, and 30bp protein binding is unknown. The above results are now posted.