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中枢神経細胞における遺伝子発現を可視化させるためのキメラマウス作製

创建嵌合小鼠以可视化中枢神经细胞中的基因表达

基本信息

批准号：
07458212
负责人：
SAFFEN DAVID
金额：
$ 4.67万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、マウスのzif268遺伝子をβ-ガラクトシターゼレポーター遺伝子に変えるターゲッティングベクターの構築とテストを終了した。このターゲッティングベクターをPC12D細胞に恒常的に導入したところ、zif268遺伝子を発現する試薬の添加によって、β-ガラクトシダーゼ活性の顕著な上昇が見られた。次に、このターゲッティングベクターをTT2マウス胎児幹細胞に導入し、ネオマイシン耐性を持つコロニーを100個単離した。これらのコロニーから、染色体DNAを抽出し、相同組み替えを起こしたDNA断片のみを増幅するように設計されたオリゴヌクレオチドプライマーを用いてPCR解析を行ったところ、ターゲッティングベクターが、内在のzif268遺伝子の位置に挿入されたCell lineが3つ得られた。現在、この細胞を用いてキメラマウスの作成を行っている。また我々は、β-ガラクトシダーゼレポーター遺伝子をPC12D細胞に恒常的、あるいは一時的に導入し、その発現を調べる実験を行った。昨年、我々は、その予備実験の結果報告の中で、真のzif268遺伝子の発現誘導の観察には、レポーター遺伝子の発現ベクターが染色体に挿入されることが必要であることを示唆するデータが得られたとしていたが、今回の実験により、レポーター遺伝子としてβ-ガラクトシダーゼを持つ発現ベクターは、一時的な導入によってもzif268遺伝子の発現誘導を正しく表すことがわかった。一方、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼを持つ発現ベクターは、その導入が一時的であるか恒常的であるかにかかわらず、NGF刺激に対しては顕著な応答を示すが、カルバコールやホルボールエステル、サプシガルギン、フォルスコリンなどの内在のzif268遺伝子の発現を誘導する他の試薬に対する応答は非常に弱いということがわかった。

I am pleased that the construction and construction of the Mausu no zif268 gene, which has been transformed into a β-, has come to an end. In this case, the PC12D cells are constantly introduced into the cell, and the zif-268 gene is produced in the cell. Next, we need to find out more about the introduction of fetal stem cells, the development of fetal stem cells, and the maintenance of fetal stem cells. The DNA fragments were extracted from the chromosome, and the DNA fragments of the same group were amplified. The PCR analysis was carried out in the same Cell line. Now, the cell is in the middle of the process. In addition, the expression of the protein in PC12D cells is constantly changing. Last year, we prepared a report on the results of the study. In the middle of the report, we found that the detection of gene expression induced by gene expression was necessary to detect the gene expression of gene expression. The gene expression induced by gene expression was necessary to detect the gene expression of gene expression. The introduction of the gene is very important. On the one hand, the expression of the gene and the induction of the gene are constantly changing, and the NGF stimulation is responding to the response of the gene. The expression of the gene and the induction of the gene and the response of the gene are very weak.