Is 240kDa protein, a substrate of G-kinase, IP_3 receptor of smooth muscle?

240kDa 蛋白(G 激酶的底物)是平滑肌的 IP_3 受体吗?

基本信息

  • 批准号:
    07670102
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 1996
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

We are investigating relaxation mechanisms of nitroglycerin of vascular smooth muscle and found a 240kDa protein purified from porcine aortic smooth muscle was phosphorylated by cyclic GMP-dependent protein kinase (G-kinase). Amino acid sequences of tryptic peptides of 240kDa protein are very similar to cerebellar IP_3 receptor and 240kDa protein binds IP_3 with high affinity. These results strongly suggest 240kDa protein is an IP_3 receptor of arterial smooth muscle. If the protein is IP_3 receptor, it should have Ca^<2+> channel characteristics. The final aim of this project is to determine whether 240kDa protein has Ca^<2+> channel activity or not and examine the interaction between 240kDa protein and G-kinase. For this object, we chose planar bilayr method.Using asolectin and cholesterol as membrane forming lipids, high resistance planar membrane (around 500GOMEGA) was established. Alamethicin used as a channel forming agent produced voltage dependent channel activity. Using alamethicin we could obtained the skill of electrophysiological technique. As fusion of artificial liposome into planar bilayrs is very difficult, at the first step we tried to determine channel activity of skeletal and smooth muscle SR as a natural liposome. Using skeletal muscle SR,we observed some channel activity with 10% of experiment but single channel activity was observed only 3% of experiment. We failed to get any channel activity of smooth muscle SR.Finally we tried to fuse liposomes of 240kDa protein into planar membrane, but no channel activity was observed.These results indicate that we need more experience of planar membrane experiment. We will continue the experiment to increase probability of channel activity of skeletal muscle SR which is relatively easy to establish the methods, then move to measure Ca^<2+> channel activity of smooth muscle SR and 240kDa protein.
我们在研究硝酸甘油对血管平滑肌的舒张机制时发现,从猪主动脉平滑肌中纯化的一个240 kDa的蛋白质被环GMP依赖的蛋白激酶(G-kinase)磷酸化。240 kDa蛋白的胰蛋白酶肽的氨基酸序列与小脑IP_3受体非常相似,并且240 kDa蛋白与IP_3具有高亲和力。这些结果有力地表明240 kDa蛋白是动脉平滑肌的IP_3受体。如果该蛋白是IP_3受体,则应具有Ca^<2+>通道特性。本项目的最终目的是确定240 kDa蛋白是否具有Ca^2+通道活性,并研究240 kDa蛋白与G-激酶的相互作用。为此,我们选择了平面双层膜法,以asolectin和胆固醇为成膜脂质,构建了高阻力的平面膜(约500 GOMEGA)。使用丙甲霉素作为通道形成剂产生电压依赖性通道活性。应用丙甲霉素可获得电生理技术。由于将人工脂质体融合到平面双层中是非常困难的,因此我们首先尝试将骨骼肌和平滑肌SR作为天然脂质体来测定通道活性。使用骨骼肌SR,我们观察到一些通道活动与实验的10%,但观察到单通道活动只有3%的实验。我们未能获得平滑肌SR的任何通道活性。最后我们尝试将240 kDa蛋白质的脂质体融合到平面膜中,但没有观察到通道活性。这些结果表明我们需要更多的平面膜实验经验。我们将继续实验以提高比较容易建立方法的骨骼肌SR的通道活性的可能性,然后转移到测量平滑肌SR和240 kDa蛋白的Ca^<2+>通道活性。

项目成果

期刊论文数量(19)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
豊里晃,他: "ノルアドレナリンで収縮させたラット大動脈平滑筋のニトログリセリン、ニトロプルシドによる弛緩." 日本歯科麻酔学会誌. 24. 62-69 (1996)
Akira Toyosato 等人:“硝化甘油和硝普钠对去甲肾上腺素收缩的大鼠主动脉平滑肌的松弛作用。”日本牙科麻醉学会杂志 24. 62-69 (1996)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
K. Kato他: "Ethanol infetion on allylamine - induced experimental subendocardial fibrosis." Alcohol. 12. 233-239 (1995)
K. Kato 等人:“乙醇感染烯丙胺 - 诱导实验性心内膜下纤维化”。 12. 233-239 (1995)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
S. Hirono他: "Expression of induceible nitric oxide synthase in rat experimental autoimmunue myocarditis with special reference to changes in cardiac hemodynamics." Circ. Res. 80. 11-20 (1997)
S. Hirono 等人:“大鼠实验性自身免疫性心肌炎中诱导型一氧化氮合酶的表达,特别涉及心脏血流动力学的变化。”Circ. 80. 11-20 (1997)
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Sasage H, Nakazawa M, Arakawa M, Imai S: "Contribution of cyclic GMP generation to the relaxation by nipradilol in the rabbit aorta." Gen. Pharmacol. 26. 85-91 (1995)
Sasage H、Nakazawa M、Arakawa M、Imai S:“循环 GMP 的生成对尼普地洛在兔主动脉中的松弛作用的贡献。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
広野 暁 他: "ラット実験的自己免疫姓心筋炎における誘導型NO合成酵素の発現と心血行動態の経時的変化." 心筋の構造と代謝-1995. 18. 293-300 (1996)
Akira Hirono 等人:“大鼠实验性自身免疫性心肌炎中诱导型 NO 合酶的表达和心脏血流动力学的暂时变化。心肌的结构和代谢 - 1995 年 18. 293-300 (1996)”
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