マイクロマス培養の共焦点顕微鏡観察による細胞系譜マーカー分子の免疫組織化学的検討

使用微团培养物的共聚焦显微镜对细胞谱系标记分子进行免疫组织化学研究

• 批准号: 07771634
• 负责人: 菅原 眞紀
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771634/
• 关键词: 軟骨形成,; マイクロマス,; モノクローナル抗体,; 細胞外基質,; 免疫組織化学,; 共焦点レーザー顕微鏡

発生ステージ36の鶏胚後肢芽中軸組織を免疫原とした一連のモノクロ抗体を,凍結切片による予備的な免疫組織化学的スクリーニングの結果に基づき5群に分類した(A,軟骨組織特異的2種;B,神経組織或いは筋組織特異的20種;C,細胞外の線維状および基底膜様構造に特異的9種;D,間充織基質を顆粒状に染め出すもの5種;E,その他12種)。これらは,IgG1 33%, IgG2b 20%, IgG3 3%, IgM 44%であった。conventionalな螢光顕微鏡および共焦点レーザー走査顕微鏡(LSCM)を用いた検討の結果、A,C,D群からそれぞれC5G11抗体(IgG1), G12F3抗体(IgG1), E12B2抗体(IgG1)を選抜した。C5G11陽性反応は,培養下マイクロマスの軟骨形成領域にPNAレクチン陽性反応の出現よりもやや遅れて出現し,軟骨noduleが明らかとなる培養3.5〜5.5日では軟骨基質,特に領域基質に強く認められた。この反応はII型collagenやchondroitin(Ch)硫酸によって吸収されず,ChABCase消化でも消失しなかった。また,Ch-O-,Ch-4-,Ch-6-硫酸特異抗体による染色パターンとも異なっていた。一方,G12F3陽性反応は軟骨基質に存在せず,fibronectin(FN)やcollagensと異なるその染色パターンからHurleら(1988)の報告にあるdorso-ventral(DV) fibrilに選択的に結合する抗体と考えられた。G12F3抗原はSDS-PAGE/Western blot解析の結果,200kD以上の分子ではあるが,DV fibril関連分子と見られるFN或いはtenascinとも異なっていた。E12B2抗体による染色パターンは,ES1抗体(Mjaatvedtら,1991)のパターンと類似し,抗原分子相互の関連性を現在検討中である。なお,B群からは,in vivoおよびマイクロマス培養下で筋細胞を特異的に染色する複数の抗体が得られた。これらの抗原分子のサイズは,互いにそしてまたdesminとも異なっていた。E群の抗体には,LSCMによる観察所見から考えて,内皮細胞,間葉細胞ゴルジ体,帆血球系細胞に特異的なものがあった。

発 raw ス テ ー ジ 36 の 鶏 embryo bud the hind legs axis organization を immunogen と し た for の モ ノ ク を ロ antibody, frozen section に よ る reserve of な immunohistochemical ス ク リ ー ニ ン グ の results に づ き 5 group of に classification し た (A, 2 kinds of cartilage tissue specific; B, god 経 organization or い は 20 of the muscle tissue specific; C, 9 kinds of extracellular plus-line dimensional および basement membrane-like structures に specific; D, the interlaced woven matrix を granular に is dyed め to produce す <s:1> of 5 kinds; E,そ he has 12 kinds. Youdaoplaceholder2 れら れら,IgG1 33%, IgG2b 20%, IgG3 3%, IgM 44%であった. But な fluorescent 顕 micromirror お よ び total focus レ ー ザ ー walkthrough 顕 micro mirror (LSCM) を い た beg の 検 results, A, C, D group か ら そ れ ぞ れ C5G11 antibody (IgG1), G12F3 antibody (IgG1), antibody (IgG1) を E12B2 sorting し た. C5G11 positive anti 応 は, cultivate the マ イ ク ロ マ ス の cartilage formation field に PNA レ ク チ ン positive anti 応 の appear よ り も や や 遅 れ て し, cartilage nodule が Ming ら か と な る training 3.5 ~ 5.5 days で は cartilage matrix, especially strong matrix に く に field to recognize め ら れ た. こ の anti 応 は type II collagen や chondroitin sulfate (Ch) に よ っ て suction 収 さ れ ず, ChABCase digestion で も disappear し な か っ た. Youdaoplaceholder0,Ch-O-,Ch-4-,Ch-6- sulfuric acid-specific antibody による staining パタ パタ と と なって た た. Side, G12F3 positive anti 応 は cartilage matrix に exist せ ず, fibronectin (FN) や collagens と different な る そ の dyeing パ タ ー ン か ら Hurle ら report (1988) の に あ る dorso - ventral (DV) fibrilに selects 択 's に binding する antibody と to test えられた. The <s:1> results of <s:1> SDS-PAGE/Western blot analysis of G12F3 antigen showed that for <s:1> molecules above 200kD, で で あるが あるが and あるが, and for DV fibril related molecules, と can be found in られるFN or <s:1> tenascinと と different なって た た た. E12B2 antibody に よ る dyeing パ タ ー ン は, ES1 antibodies (Mjaatvedt ら, 1991) の パ タ ー ン と similar し, antigen molecules mutual の masato even sex を 検 now please で あ る. な お, B group of か ら は, the in vivo お よ び マ イ ク ロ マ ス cultivate を で muscle cells under specific に dyeing す る plural が の antibodies to ら れ た. The <s:1> れら <s:1> antigenic molecules <s:1> サ サ ズ ズ た, and they are mutually similar to each other in にそ にそ てまた, てまた, desminと, と, and なって, た, た. E group of antibody に の は, LSCM に よ る 観 was seen か ら exam え て, endothelial cells, mesenchymal ゴ ル ジ body, sail blood cell に specific な も の が あ っ た.

项目成果

菅原 眞紀: "改良マイクロマス培養下の鶏胚肢芽間葉細胞による軟骨形成の検討" 日大歯学. 68. 979-990 (1994)

Maki Sukawara：“改良微团培养下鸡胚肢芽间充质细胞软骨形成的研究”日本大学牙科 68. 979-990 (1994)。

Sugahara, M.: "The influence of scattering on temporo-regional proliferation in the cultured Madin-Darbycaninekidney(MDCK)cells" J. Nihon Univ. Sch. Dent. 37. 201-208 (1995)

Sugahara, M.：“散射对培养的 Madin-Darbycaninekidney (MDCK) 细胞颞区增殖的影响”J. Nihon Univ。