マウス腹腔マクロファージのP. gingivalis LPSレセプターの解析

小鼠腹腔巨噬细胞中牙龈卟啉单胞菌LPS受体的分析

• 批准号: 07771720
• 负责人: 渡辺 清子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771720/
• 关键词: マウス腹腔マクロファージ; Porphyromonas gingivalis; lipopolysaccharide(LPS); LPSレセプター; Cytokine

歯周病原細菌と考えられているPorphyromonas gingivalisのLPSは、LPS不応答性C3H/HeJマウスに対して活性を示すことが報告されている。今回、P. gingivalis LPSからリピドAをLPSを1%酢酸で100℃、2時間処理後クロロホルム/メタノール(1:1)により抽出し、PCP混液に溶解回収し、イオンクロマトグラフィーおよびSephadexLH-20を用いて精製した。P. gingivalisのリピドAは、LPS不応答性C3H/HeJマウスの脾細胞に対して明らかなマイトゲン活性を示した。また、LPS応答性C3H/HeNマウスおよびLPS不応答性C3H/HeJマウスのチオグリコレート刺激腹腔マクロファージを、10、1、0.1μg/ml濃度のP. gingivalis LPS、リピドA、およびSalmonella typhimurium リピドAで刺激した培養上清中のIL-1、IL-6およびTNF量を測定して検討した結果、本リピドAは、LPS応答性C3H/HeNマウス腹腔マクロファージから、S. typhimuriumリピドAと同程度のIL-1、IL-6およびTNF-α産生を誘導した。さらに、C3H/HeJマウスに対するサイトカイン産生誘導能はC3H/HeNマウスの場合と比較しても低いものの、明らかにIL-6およびTNF-α産生を誘導した。また、FITC結合抗体を用いてP. gingivalisおよびS. typhimurium とマウス細胞との結合性をフローサイトメーターにより解析した結果、P. gingivalisLPSは、LPS応答性C3H/HeNマウスの胸線細胞、脾臓細胞、ならびに腹腔マクロファージに対して、濃度依存的に結合スすることが確認された。この結合強度は、LPS不応答性C3H/HeJマウス細胞に対しても同様の結果であった。LPSレセプターとしては、細胞膜表面のCD14分子が考えられているが、マウスCD14に対する抗体が発売されたので、この抗体を使用して、LPS応答性C3H/HeNマウスおよびLPS不応答性C3H/HeJマウスの腹腔をマクロファージ上のLPSレセプター分子が同一のものであるかを今後検討する予定である。

Study on the activity of LPS in Porphyromonas gingivalis, LPS resistant C3H/HeJ, and so on. This time, P. gingivalis LPS was extracted from the mixture of LPS and 1% acetic acid at 100℃ for 2 hours. The mixture was dissolved and recovered. The mixture was purified with Sephadex LH-20. P. gingivalis is A sensitive C3H/HeJ cell. Also, LPS responsive C3H/HeN and LPS non-responsive C3H/HeJ The levels of IL-1, IL-6 and TNF in culture supernatant were measured by Gingivalis LPS, LPS A, and Salmonella typhimurium A. Results: LPS A, LPS A, Typhimurium is produced to the same extent as IL-1, IL-6 and TNF-α. C3H/HeJ is the most effective way to induce IL-6 and TNF-α production. FITC-conjugated antibodies are used in the production of P. gingivalisおよびS. Typhimurium and its cellular binding properties were analyzed. The results showed that P. genivalis LPS and LPS were sensitive to C3H/HeN. The binding strength of LPS is different from that of LPS. The use of LPS responsive C3H/HeN and LPS responsive C3H/HeJ antibodies to CD14 molecules on the cell membrane surface will be discussed in the future.