歯周病原性細菌の特異的表層抗原に対する体液性免疫応答の解析

牙周病原菌特异性表面抗原的体液免疫反应分析

• 批准号: 07771721
• 负责人: 渡邊 幹一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771721/
• 关键词: Porphyromonas gingivalis; 75K蛋白質; 線毛; 表層特異抗原; 抗体価; DNAプローブ; PCR法

本研究の目的は、まずP.gingivalisの表層特異抗原(75K蛋白質抗原、線毛抗原)を用いて歯周炎患者の血清および歯肉溝滲出液の抗体値測定を行い、全身系と歯周局所での体液性免疫応答の相違点を検討することである。次にこれと並行して75K蛋白質の構造遺伝子断片をDNAプローブとして用い、PCR法による歯周ポケット内のP.gingivalisの特異的かつ高感度な検出方法を確立することである。実験I、全身系と歯周局所での体液性免疫応答の相違点の検討被験者は、急速進行性歯周炎患者群(RPP群)、成人性歯周炎患者群(AP群)、健常者群(N群)、各群10名計40名を用いた。抗原は、75K蛋白質抗原(75K)、線毛抗原(FIM)および全菌体抽出抗原(SUP)をP.gingivalis381株を用いてそれぞれ調製し、実験に使用した。上記被験者より血清とGCFを調製し、上記抗原を用いてELISA法によるIgG抗体価の測定を行った。その結果、全身系体液性免疫応答においては、N群に比べてRPP群とAP群が3種抗原とも有意に抗体価が上昇していた。SUPに対して抗体価が上昇していた被験者はすべて75KとFIMの両者あるいは片方に対しても抗体価が上昇していた。一方、SUPに対しては抗体価の上昇が明らかではない被験者の中に、75KとFIMの両者あるいは片方に対して抗体価が有意に上昇していた被験者が5名存在した。この5名の被験者はすべて、重度の辺縁性歯周炎患者であった。これらのことから、P.gingivalisの表層特異抗原である75K蛋白質と線毛の有用性が強く示唆されたと考えている。現在、同一被験者の歯周ポケットより採取したGCFを用いて、ELISA法によるIgG抗体価を測定し、全身系と歯周局所での体液性免疫応答の類似点・相違点を分析中である。実験II.DNAプローブを用いたP.gingivalisの歯周ポケットからの検出.まず最初に既にクローニングされている75K蛋白質構造遺伝子を含む4.2KbのBarHI断片を抽出・精製しプローブとした。次にP.gingivalis10株、P.gingivalis以外の口腔内細菌15種16株を用いてサザンハイプリダイゼーションを行った結果、今回調べたP.gingivalis10株にはすべて75K蛋白質遺伝子が存在し、その他の菌種には存在しないことが判明した。すなわち、75K蛋白質遺伝子は高い種特異性を有していることが明らかになった。現在、上記DNAプローブを用いたPCR法によるP.gingivalisの歯周ポケットからの検出法を確立しつつある。

The purpose of this study was to investigate the correlation between humoral immune responses in systemic dentistry and periodontitis by detecting antibodies to P. gingivalis surface specific antigens (75K protein antigen, hair antigen) in serum and crevicular exudates from periodontitis patients. In this paper, we establish a new method for detecting P. gingivalis DNA fragment by PCR and PCR. The humoral immune responses of the whole body and dentistry were compared with those of the rapid progressive periodontitis group (RPP group), the adult periodontitis group (AP group), and the normal group (N group). Antigen, 75K protein antigen (75K), Filament antigen (FIM) and Whole cell extract antigen (SSP) were prepared and used in P.genivalis381 strain. The serum and GCF of the above mentioned antigens were prepared and the IgG antibody was determined by ELISA. As a result, systemic humoral immunity increased significantly compared to RPP group. The antibody level rises to 75K and the antibody level rises to 75K. One side, SUP, anti, anti. Five of the patients were diagnosed with severe periodontitis. The surface specific antigen of P. genivalis is 75K protein and the usefulness of hair are strongly demonstrated. Now, in the same subject, the humoral immune response is similar to that in the same subject, and the IgG antibody is detected by ELISA. II.DNA fragmentation in the use of P. genivalis in the development of DNA fragmentation. Initially, the protein structure of 75K was extracted and refined from the protein fragment containing 4.2 Kb. 10 strains of P. genivalis and 16 strains of 15 species of oral bacteria other than P. genivalis were tested. The results showed that 10 strains of P. genivalis had 75K protein gene and other species existed. The 75K protein gene has high species-specificity. Now, note that the DNA detection method is established by PCR.