培養細胞を用いたニフェジピン誘発歯肉増殖に関する研究

硝苯地平诱导牙龈增殖的培养细胞研究

• 批准号: 07771722
• 负责人: 飯山 正夫
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771722/
• 关键词: 歯肉増殖; カルシウム拮抗剤; ニフェジピン; ジルチアゼム; 培養歯肉線維細胞

慢性辺縁性歯周炎患者2名(A;47歳女性、B;49歳男性)より歯周外科処置時に採取した歯肉片よりアウトグロスした歯肉線維芽細胞(3〜9継代)を、各種濃度のニフェジピン、diltiazem(HERBESSOR)、アレビアチンを含む培地で一定時間培養し細胞数、コハク酸脱水素酵素活性(SDA)、ミトコンドリアの形態的変化を調べた。その結果diltiazemのみが顕著な効果を示したのでこれについてのみ詳細な実験を行った。(基本的にトリプリケ-トで実験を行った)1.SDA:濃度依存性実験では、最終濃度0,5,10,20,40,60,80及び100μg/mlのdiltiazemを添加し72時間培養した。経時的変化の実験では系列毎に培養開始より0,24,36,48,60、66及び72時間後に最終濃度が40μg/mlとなるように刺激物を加え総計72時間培養した。培養後にSDAをCelltiter96^<TM>Cell Proliferation Assay(Promega Co., USA)を用いて測定した。その結果20〜40μg/mlのdiltiazem刺激でSDAはピークを示しより濃い濃度では抑制が見られた。また、diltiazem50,100μg/ml刺激では3時間以降、25μg/ml刺激では12時間以降無刺激群に比べ有意に高いSDAを示した。0〜24時間の短時間培養では刺激群間に有意差は見られなかった。しかし48〜72時間の長時間培養では25,50μg/mlの方が100μg/ml刺激よりも有意に高いSDAを示した(p<0.05)。2.細胞数:40μg/mlのdiltiazem刺激で、3日間培養では細胞数、生細胞比率ともに刺激群と無刺激群間に有意差は認められなかったが、10日間培養では刺激群で有意に低かった。(p<0.01)3.培養上清中の蛋白濃度測定:0、3、6、12、24、48時間後の40μg/mlのdiltiazem刺激上清中の蛋白濃度を測定したところ12、24時間で有意に刺激群で高かった。((p<0.05)4.ミトコンドリア染色:カバー・スリップ上に培養した細胞をrhodamin123(10μg/ml)含有10%FBSMEMにて37℃30分培養し洗浄後チャンバー・スライドグラス上に同培地でマウントし蛍光顕微鏡(485nmUV)で観察したところ無刺激群に比べ刺激群では、ミトコンドリアは短く屈曲したものが多く、コハク酸脱水素酵素染色でより強く陽性に染まった。

Two patients (A;47-year-old female, B;49-year-old male) with chronic periodontitis were selected from the group consisting of 3 to 9 generations of dental-line germ cells (3 to 9 generations), cultured for a certain period of time with various concentrations of vitamin D, diltiazem(HERBESSOR), and vitamin D. The changes in cell number, serum acid dehydrin enzyme activity (SDA), and morphology of vitamin D were modulated. The results of the diltiazem are detailed. 1. SDA: Concentration Dependence: Diltiazem is added at final concentrations of 0, 5, 10, 20, 40, 60, 80 and 100μg/ml for 72 hours. The changes in the time series were observed at the beginning of incubation at 0, 24, 36, 48, 60, 66, and 72 hours, and the final concentration was 40μg/ml at the end of incubation at 72 hours. ^<TM>Cell Proliferation Assay(Promega Co., Ltd., USA). Results 20 ~ 40μg/ml of diltiazem stimulates SDA and inhibits SDA in concentrations Diltiazem50,100μg/ml for 3 hours, 25μg/ml for 12 hours without stimulation 0 ~ 24 hours of short-term culture time is the stimulation of the group between the intention to see the difference. When cultured for 48 ~ 72 days, the concentration of 25 μg/ml, 50 μg/ml and 100μg/ml increased significantly (p&lt;0.05). 2. Number of cells:40μg/ml Diltiazem Stimulated, 3 Days Cultured, Number of Cells, Ratio of Cells Produced, Stimulated, Unstimulated, Intentional Difference, 10 Days Cultured, Stimulated, Intentional Low. (p&lt;0.01)3. Determination of protein concentration in culture supernatant: 40μg/ml of protein concentration in culture supernatant stimulated by diltiazem after 0, 3, 6, 12, 24, 48 hours. ((p&lt;0.05)4. Staining: Cells cultured at 37℃ for 30 min with rhodamine 123(10μg/ml) containing 10% FBSMEM. After washing, cells cultured at 37℃ for 30 min were examined by light microscopy (485 nm UV).

项目成果

飯山正夫 他3名: "In vitroにおけるヒト歯肉線維芽細胞に対するdiltiazem(HERBESSER【○!R】)の効果" 日本歯周病学会誌. 37. 116-116 (1995)

Masao Iiyama 等 3 人：“地尔硫卓 (HERBESSER [○!R]) 对体外人牙龈成纤维细胞的影响”日本牙周病学会杂志 37. 116-116 (1995)。

M. IIYAMA 他3名: "Effect of diltiazem(HERBESSER【○!R】)on gingival fibroblast in vitro" ASIAN PACIFIC SOCIETY OF PERIODONTOLOGY. 27-27 (1995)

M. IIYAMA 等 3 人：“地尔硫卓（HERBESSER【○！R】）对体外牙龈成纤维细胞的影响”，亚太牙周病学会 27-27（1995）。