ヒトファイブロネクチンEIIIBドメインの生物学的機能の検索

人纤连蛋白EIIIB结构域生物学功能的探索

• 批准号: 07771733
• 负责人: 魚島 マリコ
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771733/
• 关键词: ファイブロネクチン; 細胞接着; 歯肉線維芽細胞; 細胞外マトリックス

ファイブロネクチン(Fn)は細胞外マトリックスを構成する代表的な糖タンパク質であり、細胞接着、遊走、分化などに重要な働きをする。各組織特有のオールタナティブスプライシングを受ける主な三つのドメイン(EIIIB,EIIIA,IIICS)の内、前者二つのドメインは、初期発生及び創傷治癒過程においてスプライシングを受けずに多く発現する事が知られているが、その生物学的活性は未だわかっていないので、検索した。(1)リコンビナントヒトFnフラグメントの分離精製:FnタイプIIIドメインから構成されるフラグメントでEIIIB,EIIIAを含むか含まないかにより8種類のものをpET expression systemを用い、原核細胞に発現させ、分離精製した。さらにMonoQクロマトグラフィーを用いて精製度をあげた。これらフラグメントの精製純度はSDS/PAGE法にて約90%程度であった。(2)吸着試験:上記タンパクがポリ塩化ビニルアッセイ・プレートに吸着されることをELISA法を用いて確認したところ、いずれのフラグメントも約10nMで安定して吸着された。(3)細胞接着試験:二種類の細胞接着試験を試みた結果、ハムスター継代培養線維芽細胞(NIL)とヒト歯肉線維芽細胞(HGF)はいずれのフラグメントに対しても接着した。EIIIBドメインを含むフラグメントは含まないものと比較し、低濃度において細胞接着が認められた。EIIIBドメインへの直接的な細胞接着は認められなかったものの、他のフラグメントとの競合試験を行なった結果、EIIIBドメインには細胞接着を促進する可能性があることが示された。EIIIAを含むフラグメントと含まないものとで、細胞接着に特に有為差はみられなかった。

Fn is an important component of extracellular structure, such as cell adhesion, migration, and differentiation. Each tissue-specific gene expression system is subject to three main factors (EIIIB,EIIIA,IIICS), the former two factors, the early development and the wound healing process, and the occurrence of multiple events, and the biological activity of the three factors. (1)Separation and purification of Fn: EIIIB, EIIIA, 8 kinds of pET expression system, prokaryotic cell development, separation and purification Monocracy The purity of the product was about 90% by SDS/PAGE. (2)Sorption test: The above mentioned method was used to confirm the adsorption stability by ELISA method. (3)Cell follow-up test: Two types of cells were follow-up tested and the results showed that Housada cultured thread germ cells (NIL) and Housada cultured thread germ cells (HGF) were successfully tested. EIIB is the most common form of EIIB. EIIB is the most common form of EIIB. EIIB's direct response to cell phone calls is likely to result in cell phone calls being promoted. E3 contains the following information: