ヒトファイブロネクチンEIIIBならびにEIIIAドメインの細胞接着機能の検索

寻找人纤连蛋白 EIIIB 和 EIIIA 结构域的细胞粘附功能

• 批准号: 08672182
• 负责人: 魚島 マリコ
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08672182/
• 关键词: ファイブロネクチン; 細胞接着; 線維芽細胞; 細胞外マトリックス; EIIIBドメイン; EIIIAドメイン

ファイブロネクチン(Fn)は細胞外マトリックスを構成する代表的な糖タンパク質であり、細胞接着、遊走、分化などに受容な働きをする。各組織特有のオールタナティブスプライシングを受ける主な三つのドメイン(EIIIB,EIIIA,IIICS)の内、前者二つのドメインは、初期発生及び創傷治癒過程においてスプライシング受けずに多く発現する事が知られているが、その生物学的活性は未だわかっていないので、検索した。(1)リコンビナントヒトFnフラグメントの分離精製:FnタイプIIIドメインから構成されるフラグメントでEIIIB,EIIIAを含むか含まないかにより8種類ものをpET expression systemを用い、原核細胞に発現させ、クロマトグラフィーを用いて分離精製した。(2)吸着試験:上記タンパクがポリ塩化ビニルアッセイ・プレートに吸着されることをELISA法を用いて確認したところ、いずれのフラグメントも約10nMで安定して吸着された。(3)細胞接着試験:細胞接着試験の結果、ハムスター継代培養線維芽細胞(NIL)とヒト歯肉線維芽細胞(HGF)はいずれのフラグメントに対しても接着した。EIIIBドメインを含むフラグメントは含まないものと比較し、低濃度においてコントロールの血漿Fn同様の強い接着が認められた。EIIIBドメインへの直接的な細胞接着は認められず、他のフラグメントとの競合試験を行なった結果、EIIIBドメインには細胞接着を促進する可能性があることが示された。EIIIAを含むフラグメントと含まないものとで、細胞接着に特に有為差はみられなかった。接着班とストレスファイバーを蛍光染色したところ、EIIIBドメインを含むフラグメントは含まないものと比較し、血漿Fn同様の強い細胞の接着と伸展を示した。したがって、EIIIBドメインには細胞接着を促進する可能性があることがさらに確認された。

The expression of Fn represents the expression of Fn, cell adhesion, migration, and differentiation. Each tissue-specific gene expression is characterized by three main genes (EIIIB,EIIIA,IIICS), the former two genes, the early development and the wound healing process, and the occurrence of multiple genes. The biological activity of each gene expression is not detected. (1)Separation and purification of Fn: EIIIB, EIIIA, 8 kinds of pET expression system, prokaryotic cell production, separation and purification. (2)Sorption test: The above mentioned method was used to confirm the adsorption stability by ELISA method. (3)Cell succession test: The results of cell succession test show that NIL cells and HGF cells are cultured in vitro. EIIB has a low concentration of plasma Fn and a low concentration of plasma Fn. EIIIB's direct response to the response, its response to the response, and its response to the response. E3 contains the following information: Then, the plasma Fn was stained with light, and the EIIB was stained with light, and the plasma Fn was stained with light, and the cells were stained with light. EIIB is the first to confirm the possibility of a cellular link.