コレステリルエステル転送蛋白遺伝子異常の高感度スクリーニング法の検討

胆固醇酯转移蛋白基因异常的高灵敏度筛查方法的检查

• 批准号: 07772252
• 负责人: 稲野 浩一
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07772252/
• 关键词: コレステリルエステル転送蛋白; CETP欠損症; 高HDL‐C血症; PCR‐SSCP; 日常遺伝子検査; 非RI発色法; アポE含有HDL

1.検体保存条件の検討条件検討の結果、以下のようなことが判った。保存状態は滅菌条件下で血液、バッフィコート、DNA溶液ともに良好な結果となった。保存温度については-20℃、-80℃について検討したが、DNA溶液についてはいづれも良好に保存された。保存用添加物については、遺伝子解析の目的には特に添加の必要はなかった。保存期間についても1年経過したDNA溶液でもなんら変化を伴うことなく再現的にPCR反応に供することができた。2.CETP遺伝子のPCR法による特異的増幅反応条件の検討当初予定していたイントロン14スプライスドナー部位のみならず、エクソン15やエクソン10の変異部位に対するプライマーも合成し、全てのPCR反応至適条件を決定した。3.PCR‐SSCP法によるCETP遺伝子の多型出現条件の検討イントロン14スプライスドナー部位及びエクソン15については、あらかじめ変異を調べてある患者検体を陽性コントロールとして用いることで検討を行い、良好に多型を検出できる条件を決定した。4.高HDL血症患者の検体についてのCETP遺伝子変異のスクリーニングと臨床検査としての適応性の検討当初の予定とは異なるが、当大学附属病院より高HDL血症患者検体約100検体を入手してスクリーニングを行った。同時再現性及び日差再現性はともに良好でり、臨床検査として十分な適応性があると判断された。また、HDL‐C値とCETP遺伝子変異の有無の間にはP<0.05で有意差が認められ、興味ある知見を得た。さらに、計画時には予定していなかったことだが、CETP欠損症の際にアポE含有HDLが増加していることが知られているので、PCR‐SSCP法を用いた本方法の結果との関連についても検討を行った。その結果、高HDL血症患者のうちCETP遺伝子変異を持つ群においては、アポE含有HDL高値の頻度が変異を持たない群に比べて有意に高いことが判明し、CETP欠損症の際の高HDL‐C血症の成因を説明する一つの原因であることが分かった。これについては現在投稿準備中である。PCR‐SSCP法によるCETP遺伝子解析の非放射性標識による検出法への移行の検討検討した系はビオチン標識プライマーを用いたPCR法とブロッテイング及びアルカリフォスファターゼ発声法である。結果は良好で、操作性、コスト、再現性、データの保存性などの面でこれまでの放射性標識に比べて臨床検査室レベルへの適用に十分な有用性が認められた。本結果はすでに臨床病理学会誌へ掲載されている。

1. The results of the examination of the storage conditions and the examination of the examination conditions are as follows: Preserved under sterile conditions, blood, DNA solution, good results Storage temperature: -20℃,-80℃, DNA solution: good storage For the purpose of preserving additives and genetic analysis, it is necessary to add them. The preservation period is 1 year. DNA solution can be used for PCR amplification. 2. To determine the optimal conditions for PCR amplification of CETP gene. 3. PCR-SSCP method for CETP gene polymorphism detection conditions to determine the conditions for the detection of positive CETP gene polymorphism and good polymorphism detection. 4. The CETP gene profile of patients with hyperHDLemia was investigated by clinical examination and initial evaluation. About 100 samples of patients with hyperHDLemia were investigated by university affiliated hospitals. Simultaneous reproducibility and day-to-day reproducibility are good, clinical examination is very suitable, and judgment is good. The difference between HDL-C and CETP was P<0.05. The difference between HDL-C and CETP was significant. The results of this method are discussed in the context of CETP deficiency. The results showed that the frequency of high HDL levels in patients with CETP deficiency varied significantly, and the causes of high HDL-C levels in patients with CETP deficiency were explained.これについては现在投稿准备中である。PCR-SSCP method for CETP gene analysis of non-radioactive identification, detection, migration and analysis of the system of identification, detection, PCR method, detection, and detection. The results are good, and we believe that these radioactive markers are very useful in terms of operability, usability, reproducibility, and data preservation compared to their application in clinical laboratories. These results were reported in the Journal of Clinical Pathology.

项目成果

稲野浩一: "非RI発色法を用いたPCR‐SSCP法の日常遺伝子検査法としての有用性" 臨床病理. 44. 90-92 (1996)

Koichi Inano：“使用非 RI 染色方法作为常规基因检测方法的 PCR-SSCP 方法的实用性”《临床病理学》44. 90-92 (1996)。