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神経細胞分化に及ぼすDNAメチル化の影響

DNA甲基化对神经元分化的影响

基本信息

批准号：
13780629
负责人：
稲野浩一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに代表者らは1)成体マウス脳において維持型DNAメチル化酵素(Dnmt1)が比較的多量に発現していること、2)神経細胞においてそのDnmt1の大部分が細胞質に局在していることを明らかにしていた。そこで本課題では、神経細胞におけるDnmt1の機能の一部を明らかにする目的で未分化状態の培養神経細胞N1E-115においてDnmt1を過剰発現させたとき、分化誘導に与える影響を調べることを目的とした。文献検索などから今のところDnmt1の安定過剰発現細胞株の報告はまず見あたらず、Dnmt1の活性過剰が細胞に与える影響が大きいことが予想された。そこで本課題ではテトラサイクリンの有無で導入した遺伝子の発現をオン・オフ可能なTet-Offの系を、レトロウイルスベクターを使って培養細胞に導入し、安定過剰発現細胞株の樹立を計画した。導入した遺伝子はmyc-tagをN末に連結したマウスDnmt1の全長cDNAである。現在までのところ、目的の培養神経細胞N1E-115への遺伝子導入が遅れており、安定過剰発現株のクローニング中である。一方、対照用としてマウス繊維芽細胞のC3H10T1/2及び分化誘導可能な筋芽細胞C2C12においても同様の安定過剰発現株を作製し、既にそれぞれ1クローンずつが樹立できている。現在性状解析中であるが、プレリミナリーな結果ではどちらの細胞株でもテトラサイクリンの除去でDnmt1の発現を誘導しても少なくとも2日間の間は光学顕微鏡下における形態学的な変化は全く観察できていない。本課題で用いたレトロウイルスベクターとテトラサイクリン誘導系のシステムにおける安定発現株の取得効率は、繊維芽細胞、筋芽細胞などのdoubling timeの比較的短い細胞で20-30%程度と見積もられた。やはりレトロウイルスベクター系での安定発現株の取得効率の高さが確認されている。ただし、ウイルスの感染の段階をもう少し工夫すると取得効率はさらに上がる可能性がある。

2) Most of the Dnmt1 in the cytoplasm of the brain cells is present in the cytoplasm of the brain cells. The purpose of this study is to clarify the function of Dnmt1 in cultured neurons in an undifferentiated state. The results of literature review indicate that Dnmt1 cells are stable and active, and the effects of Dnmt1 on Dnmt1 cells are significant. The aim of the present study is to establish a plan for introducing and stabilizing a cell line into cultured cells by introducing or not introducing Tet-Off cells into the culture medium. The full-length cDNA of Dnmt1 was introduced into the genome. Now, we want to introduce gene into cultured neurocytes N1E-115 to stabilize the development of neurocytes. A method was used to control the differentiation of C3H10T12 cells and C2C12 cells. The results of the present analysis show that the expression of Dnmt1 in cell lines is induced by the elimination of Dnmt1 in cells. The expression of Dnmt1 in cells is induced by the elimination of Dnmt1 in cells. In this study, the ratio of stable growth of cell to stable growth of cell was 20-30% in comparison with the doubling time of cell in vitro and in vitro. The high rate of stable development of the plant was confirmed in the study. The probability of infection is higher than that of infection.