ウニ胚の骨片形成に必要な因子について

海胆胚胎中骨碎片形成所需的因素

• 批准号: 07780651
• 负责人: 清本 正人
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Ochanomizu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780651/
• 关键词: 骨片形成; 第一次間充織細胞; 小割球; バイオミネラリゼーション; ウニ胚; 細胞分化; 棘皮動物; 発生生物学

ウニ胚に内在する骨片形成に必要な因子の抽出、精製方法の検討を行った。ウニ間充織胞胚より採取した割腔液中の因子は10万×g、1時間の遠心で沈殿することから、完全に可溶化しておらず、ECMのような高分子の重合した構造物に結合した状態であると考えられる。可溶化の方法を検討した結果、8M尿素で透析することにより活性は上清に残り、失活することなく可溶化されることを確認した。尿素を含む緩衝液を使い、陰イオン交換、アフィニティー(ヘパリン)、ゲルろ過の3種のクロマトグラフィーにより活性を持った分画を得ることができた。活性分画のSDS-PAGEの結果は110、180kDの分子量を示す成分のほか、いくつかの少量の成分が含まれていた。胞胚からより効率よく因子を得るために、胞胚を1Mグリシンを含む緩衝液で処理し、細胞を解離し細胞外の成分を抽出した(解離液)。8M尿素で透析後、陰イオン交換クロマトグラフィーで分画したところ、解離液では、割腔液と比べ、同量の胞胚から5倍以上の活性が回収された。その後のカラムクロマトグラフィーによる精製やSDS-PAGEの結果は割腔液の場合と同様であった。異種間での割腔液の効果を比較したところ、バフンウニ割腔液は同種の小割球には効果があるが、ムラサキウニ小割球に対しては単独では効果がなく、馬血清成分が共存すると骨片が形成された。種によって小割球の必要とする因子や割腔液中に含まれる因子に違いがあることが示された。

There is a method to extract and refine the factors necessary for the formation of bone fragments inside the embryo.ウニIntermediate blastocyst より takes した Cut cavity fluid の factor は 100,000 × g, 1 time の telecentric で沈堂 す る こ と か ら, completeにSolubilization しておらず, ECM のようなpolymer のcoincidence したstructure にcombination したstate であると考えられる. The results of solubilization method, dialysis of 8M urea, activity of supernatant, and inactivation of solubilization of 8M urea were confirmed. Urea containing buffer solution, Yin exchange, アフィニティー(ヘパリン), ゲルThe three kinds of three kinds of のクロマトグラフィーによりactivities are divided into three kinds. The SDS-PAGE result of activity analysis is 110, the molecular weight of 180kD is 180kD, and the component is 180kD, and the component is a small amount of 180kD. Cytoblast efficiency factor is determined, blastocyst 1M buffer containing buffer is processed, and cells are dissociated and extracellular components are extracted (dissociation solution). 8M urea after dialysis, Yin イオン exchange クロマトグラフィーで分色したところ, The ratio of the dissociation solution, the ratio of the cavity cutting solution, and the activity of the same amount of embryos are 5 times or more, and the activity is recovered.その后のカラムクロマトグラフィーによるRefined SDS-PAGE の results は cutting cavity liquid の occasion and the same 様であった. Comparison of the effect of the cutting cavity liquid between different species, the effect of the cutting cavity liquid of the same species, the effect of the small cutting ball, The effect of ムラサキウニsmall cut ball に対しては単 unique では, the horse serum component が coexist するとbone flake が された. There is a necessary factor for the small cut ball, and the cut cavity fluid contains the factor that is necessary for the small cut ball.