鳥類の頚髄に起こる細胞死の機序の解明

阐明禽类颈脊髓中发生的细胞死亡机制

基本信息

批准号：
07780671
负责人：
八木沼洋行
金额：
$ 0.64万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780671/
关键词：
プログラム細胞死アポトーシス運動神経ニワトリ発生脊髄

项目摘要

本研究では、孵卵4-5日のニワトリ胚頚髄におこる神経細胞死の発生機序について細胞レベルや分子レベルで解明するために以下の3つの目標に向かって並行して研究を進めた。(1)細胞死と細胞分化や細胞周期との関係を明らかにすること。^3Hチミジンを用いたオートラジオグラフィー法やBrdUを用いた免疫組織化学法を用いて細胞死を起こしている細胞、細胞死を起こさないで生き残る細胞の最終分裂の時期を調べたところ、細胞死を起こす細胞はおおむね孵卵2.5から3.5日の間に最終分裂を終えているのにたいして、細胞死を起こさない細胞は孵卵2.5から4.5日の間に最終分裂を行っていることが明らかとなり、最終分裂の時期が細胞死を起こす細胞の決定に関与している可能性が示唆された。また、細胞死を起こす細胞は、S期を離れて少なくとも12時間以上経った細胞であることが明らかになった。(2)細胞死に関与すると思われる細胞死関連分子の発現細胞死関連分子の発現を免疫組織化学法を用いて調べた。細胞死関連抗原とされるapogenとengulfenの発現を調べたところ、頚髄における細胞死においてもその発現が見られ、頚髄における細胞死でも他の部位に起る細胞死において見られる分子と共通の分子の発現があることが確認された。また、細胞死を起こす分子として知られるインターロイキン1β転換酵素(ICE)の阻害剤を用いた実験を行ったところ、頚髄の細胞死は抑制されなかった。これに対して腰髄において孵卵6-10日に起る細胞死はICE阻害剤によって抑制された。この結果は頚髄の細胞死と腰髄の細胞死とでは細胞内機序に違いがある可能性を示唆している。(3)外植体を用いた器官培養系の確立細胞死の開始直前のニワトリ胚の頚部をやく300μm程度の切片にして、コラーゲンゲル中で培養し、12から24時間後に切片を固定し組織学的な検討を加えた。この結果、外植体中では、顕著な細胞死が起らなかった。しかしながら、培養条件下での細胞の代謝などの評価はまだ行っておらず、この結果の解釈は今後の課題となっている。

在这项研究中，我们进行了平行的研究，以阐明在细胞和分子水平的细胞和分子水平的4-5天在鸡的颈椎中发生的神经元细胞死亡的机制。（1）阐明细胞死亡，细胞分化和细胞周期之间的关系。当我们研究使用 ^3H胸他胺的放射自显影生存的细胞死亡和细胞生存的细胞最终分裂的时间时，并使用BRDU进行免疫组织化学的时间，虽然经过细胞死亡的细胞通常完成了最终划分的细胞，但在2.5天和3.5天之间，在2.5天和3.5天之间完成了最终培养的细胞，该细胞在2.5天之间进行了最终划分。确定导致细胞死亡的细胞。还揭示了导致细胞死亡的细胞至少12小时从S相释放出来。（2）使用免疫组织化学研究了与细胞死亡有关的细胞死亡相关分子的表达。当检查了被认为是细胞死亡相关抗原的Apogen和吞噬的表达时，还观察到还观察到宫颈索中细胞死亡的表达，并且在细胞死亡中甚至在细胞死亡中发生在细胞死亡中的细胞死亡中所见的分子的表达。此外，当我们使用白介素1β转化酶（ICE）的抑制剂进行实验（被称为导致细胞死亡的分子）时，颈椎死亡不会抑制。相反，冰抑制剂抑制了在第6-10天在腰部脐带中发生的细胞死亡。该结果表明，宫颈细胞死亡与腰部细胞死亡之间的细胞内机制可能存在差异。（3）首先在细胞死亡开始之前将鸡肉胚胎的颈部建立到约300μm的部分，并在胶原蛋白凝胶中培养，并在12至24小时后固定截面以进行组织学检查。结果，外植体中未发生明显的细胞死亡。但是，尚未对培养条件下的细胞代谢进行评估，而解释结果是未来的问题。