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発生早期におこる標的非依存性運動神経細胞死の機序の解明

阐明发育早期发生的目标独立运动神经元死亡的机制

基本信息

批准号：
09280203
负责人：
八木沼洋行
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Fukushima Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280203/
关键词：
p75 NGF C-JUN カスパーゼ Bcl-2 ニワトリプログラム細胞死アポトーシス

项目摘要

本研究では、ニワトリの頚髄前角で孵卵4日から5日にかけて起こる神経細胞死において死ぬべき細胞がどのようにして決定されるのか、また、細胞死の実行機序としてはどのような分子メカニズムが働いているのかを明らかにすることを目的とし、(1)生き残る細胞と死ぬ細胞とを分ける何らかの分子マーカーはないか検索する(2)細胞死関連分子の影響を調べるの2点について研究を行なった。(1)trkA,trkB,trkCおよびp75に対する免疫組織化学を細胞死の起こる直前の時期(孵卵3.5-4日)に行なった。GDNFのレセプタであるretについては、ジゴキシゲニン標識のRNAプローブを作製しin situ hybridizationを行なった。これらの結果、trkA,trkB,trkCについてはいずれも細胞死の開始時期直前には特異的な発現は見られなかった。低親和性NGFレセプター(p75)とretは前角全域に強い陽性反応が見られたが、各細胞間に大きな違いは見られなかった。p75の強い発現が見られたことからp75やNGFの機能阻害抗体を投与して細胞死への影響を検討したが、有意の影響は見られなかった。このほか、検索の結果、c-JUNがこの頚髄の細胞死の極早期のマーカーとしてTUNEL反応より優れていることが明らかとなり、今後の応用が期待される。(2)細胞死抑制機能をもつBcl-2をアデノウイルスベクタを用いて強制発現させた。孵卵3.5日の頚髄腹側にウイルス液を注入し、4.5日に固定したところ、注入部位に遺伝子発現が認められた。しかしながら、発現の割合は3-40%程度にとどまり、定量的な作用の評価はできなかった。またIL-1β変換酵素(ICE)ファミリー(カスパーゼ)の関与を調べるため、細胞死が起きている部位を実体顕微鏡下に切り出して蛋白を抽出し、各カスパーゼに特異的な基質の分解量をはかることにより酵素の活性を測定した。この結果、DEVDを特異的に分解するカスパーゼ3様の活性が部位特異的、時期特異的に頚髄前角領域で上昇していることが明らかとなった。現在、外植体培養の系で各カスパーゼ阻害剤の影響を調べている。

In this study, we determined the mechanism of cell death in the 4 th and 5 th day of incubation, and the molecular mechanism of cell death in the 4 th and 5 th day of incubation.(1) How to separate the living and dead cells from each other;(2) The influence of the molecules related to cell death; (1)TrkA,trkB,trkC and p75 were detected by immunohistochemistry. GDNF's RNA profile is controlled in situ hybridization. The result of this phenomenon, trkA,trkB,trkC, is that the cells begin to die, and the cells begin to die. The low affinity NGF gene (p75) is strongly positive in the whole region of the front corner, and it is strongly positive in the whole cell. p75 and NGF functional inhibition antibodies were used to investigate the effects of p75 on cell death. The results of this investigation, c-JUN, the results of this investigation, c-JUN, c-JUN, c-J (2)Cell death inhibition function is activated by Bcl-2, which can be induced by stress. The eggs were incubated for 3.5 days and then injected into the abdomen. The eggs were fixed for 4.5 days and the embryos were detected at the injection site. 3-40% of the time, quantitative evaluation of the effect. IL-1β-converting enzyme (ICE) is involved in the regulation of IL-1 β-converting enzyme (ICE) and the activity of ICE is measured by microscopical extraction of IL-1 β-converting enzyme protein from the site of cell death. The result is that DEVD is specific to the site and the activity is specific to the time. Now, the culture system of explants is different from the control system.