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3量体型G蛋白質βγサブユニットによる低分子量G蛋白質の活性化機構

三聚体G蛋白βγ亚基激活低分子量G蛋白的机制

基本信息

批准号：
07780694
负责人：
亀山仁彦
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780694/
关键词：
G蛋白質 ras MAPキナーゼ

项目摘要

G蛋白質βサブユニット、mycエピトープを融合させたG蛋白質γサブユニット(mycγ)およびムスカリン受容体m2サブタイプを、恒常的に過剰に発現させたCHO細胞株を分離した。この細胞ではムスカリン受容体刺激によるMAPキナーゼ活性化が著しく亢進した。またG蛋白質βサブユニット、mycγサブユニットを一過性に過剰発現させた293細胞においてもMAPキナーゼが活性化された。293細胞に同時にドミナントネガティブrasを発現させるとMAPキナーゼの活性化は抑制された。これらの細胞ではG蛋白質βγサブユニットがrasを介してMAPキナーゼを活性化していると考えられる。この2つの細胞系をもちいてG蛋白質βγサブユニットに結合すると考えられる蛋白質の単離を試みた。G蛋白質βサブユニットおよびmycγサブユニットを大量発現させた細胞株の細胞膜画分を界面活性剤で可溶化したのち抗mycモノクロナール抗体を用いてG蛋白質βγサブユニットを免疫沈降させた。この画分にG蛋白質βγサブユニットに結合する蛋白質が共沈することが期待される。対照としてmycエピトープを持たない野性型のγサブユニットを発現させた細胞を用いた。免疫沈降物の電気泳動像の比較によりG蛋白質βγサブユニットに特異的に結合すると考えられる分子量約12万kDaおよび8万kDaの蛋白質を分離した。その部分アミノ酸配列の解析を行う予定である。その情報が得られればそれをもとにcDNAクローニングを単離する計画である。

G protein beta protein, myc protein, myc protein. These cells are stimulated by the receptor and activated by MAP. G protein beta protein, myc gamma protein, and protein are transiently activated in 293 cells. 293 cells were also activated by MAP. The cells of this species are activated by beta gamma protein. These 2 cell lines were tested for protein βγ binding. G protein beta protein is expressed in large quantities in cell membrane fractions of cell lines, solubilized by anti-myc protein antibodies, and used in immune sedimentation. This protein is expected to bind to G protein beta gamma. The first one is called the "White House." Comparison of Electrophoresis Images of Immuno-Sedimentation Products: G Protein βγ-Protein Specific Binding to Protein with Molecular Weight of 120,000 kDa to 80,000 kDa The analysis of the acid sequence is given. The information obtained from the database is as follows: