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海馬のシナプス伝達長期増強の維持相における遺伝子発現

海马突触传递长期增强维持期的基因表达

基本信息

批准号：
07780700
负责人：
於保力
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

シナプス伝達の長期増強(LTP)はグルタミン酸受容体依存性に誘発され数日間維持される。本研究は、LTP維持に関与する蛋白質の遺伝子発現調節を解明することを目的とした。LTPが誘発維持される過程でカルシウム/カルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素(CaMキナーゼ)が持続的に活性化されることから、特に、CaMキナーゼIVの転写調節機能とLTPに伴い海馬で発現する脳由来神経栄養因子BDNFとの関連をまず神経細胞モデルPC12細胞で検討した。1.活性を維持したCaMキナーゼIVを哺乳類細胞で発現させることに成功した。ラットCaMキナーゼIV cDNAをRT-PCR法でクローニングできた。PCR産物を哺乳動物発現ベクターpCAGGSneoに挿入し、COS細胞にDEAE-dextran法で発現させた。カルシウム/カルモデュリン依存性リン酸化活性を測定したところ有意な活性上昇が検出され、電気泳動染色による発現蛋白質の確認とともにCaMキナーゼIVの発現を確認した。2.CaMキナーゼIV挿入ベクター、対照としてCaMキナーゼII挿入ベクターおよびベクター単体をエレクトロポレーション法を用いてPC12細胞に導入発現させた。これらのPC12細胞を神経栄養因子NGFまたはグルタミン酸で処理した後mRNAを調整することができた。3.BDNF発現をノーザンブロット法で調べた。BDNF遺伝子約400塩基をRT-PCRで増幅後、ランダムプライム法で放射性ラベルしプローブとして用いた。現在明確な結果が得られておらず、鋭意検討中である。今後、この解析を継続する。

Long-term performance testing (LTP) long-term maintenance of acid-dependent recipients for several days. In this study, LTP maintenance and protein maintenance were used to understand the purpose of this study. LTP is responsible for maintaining the activity of protein-dependent protein-dependent acidification enzymes (CaM-dependent acidification enzymes). The activation of protein-dependent protein acidification enzymes (CaM-dependent acidification enzymes) is sensitive to the activation of protein-dependent protein acidification enzymes (CaM-dependent acidification enzymes). The mechanism of LTP is associated with the presence of sea fish. BDNF is responsible for the activation of protein-dependent proteins and acidification enzymes. 1. Activity to maintain the success of CaM cells in mammalian IV cells. The CaM, the IV cDNA, the RT-PCR, the mother, the baby, the baby. The breast-feeding animals of PCR and COS cells were detected by DEAE-dextran and DEAE-dextran respectively. The concentration of protein was detected by electrophoretic assay (page), and the protein was detected by electrophoretic staining (page). The results showed that the protein was confirmed by CaM, and the IV was confirmed by electrophoresis. 2.CaM