海馬のシナプス伝達長期増強の維持相における遺伝子発現

海马突触传递长期增强维持期的基因表达

• 批准号: 07780700
• 负责人: 於保 力
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780700/
• 关键词: シナプス伝達長期増強; カルシウム; カルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素; 脳由来神経栄養因子; 遺伝子発現

シナプス伝達の長期増強(LTP)はグルタミン酸受容体依存性に誘発され数日間維持される。本研究は、LTP維持に関与する蛋白質の遺伝子発現調節を解明することを目的とした。LTPが誘発維持される過程でカルシウム/カルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素(CaMキナーゼ)が持続的に活性化されることから、特に、CaMキナーゼIVの転写調節機能とLTPに伴い海馬で発現する脳由来神経栄養因子BDNFとの関連をまず神経細胞モデルPC12細胞で検討した。1.活性を維持したCaMキナーゼIVを哺乳類細胞で発現させることに成功した。ラットCaMキナーゼIV cDNAをRT-PCR法でクローニングできた。PCR産物を哺乳動物発現ベクターpCAGGSneoに挿入し、COS細胞にDEAE-dextran法で発現させた。カルシウム/カルモデュリン依存性リン酸化活性を測定したところ有意な活性上昇が検出され、電気泳動染色による発現蛋白質の確認とともにCaMキナーゼIVの発現を確認した。2.CaMキナーゼIV挿入ベクター、対照としてCaMキナーゼII挿入ベクターおよびベクター単体をエレクトロポレーション法を用いてPC12細胞に導入発現させた。これらのPC12細胞を神経栄養因子NGFまたはグルタミン酸で処理した後mRNAを調整することができた。3.BDNF発現をノーザンブロット法で調べた。BDNF遺伝子約400塩基をRT-PCRで増幅後、ランダムプライム法で放射性ラベルしプローブとして用いた。現在明確な結果が得られておらず、鋭意検討中である。今後、この解析を継続する。

突触传播（LTP）的长期增强是在谷氨酸受体依赖性中诱导的，并保持了几天。这项研究旨在阐明参与LTP维持的蛋白质基因表达的调节。由于在LTP的诱导和维持过程中，钙/钙调蛋白依赖性蛋白磷酸酶（CAM激酶）被连续激活，因此我们首先检查了CAM激酶IV的转录调节功能与脑源性神经营养性因子BDNF之间的转录调节功能之间的关联，这在Hippocampus中表达了Hippocampus，在h2 pc的PC中表达了ltppppppppppppppppppppppppppp。 1。我们成功地表达了在哺乳动物细胞中维持其活性的CAM激酶IV。大鼠凸轮激酶IV cDNA可以通过RT-PCR克隆。将PCR产物插入哺乳动物表达载体PCAGGSNEO中，并通过DEAE-DEXTRAN方法在COS细胞中表达。当测量钙/钙调蛋白依赖性磷酸化活性时，检测到了显着增加的活性，并通过电泳染色证实了CAM激酶IV的表达。 2. CAM激酶IV插入载体，CAM激酶II插入载体作为对照，并且使用电穿孔在PC12细胞中转染并表达载体。用神经营养因子NGF或谷氨酸处理这些PC12细胞后，可以调整mRNA。 3。通过北印迹检查了BDNF的表达。大约400个BDNF基因通过RT-PCR扩增，然后使用随机Prime方法放射性标记并用作探针。当前，尚无明确的结果，我们目前正在接受强烈的考虑。将来将继续进行分析。