耐酸・耐熱性α-アミラーゼの蛋白質工学による構造と機能の解析

蛋白质工程分析酸热稳定α-淀粉酶的结构和功能

• 批准号: 07750888
• 负责人: 廣瀬 遵
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07750888/
• 关键词: α-アミラーゼ; Bacillus licheniformis

Bacillus licheniformis αに由来する耐酸・耐熱性α-アミラーゼ遺伝子の構造解析および発現に関連した以下の研究成果を得た。1.耐酸・耐熱性α-アミラーゼ遺伝子のクローニングB.licheniformis αのゲノムDNAより、耐酸・耐熱性α-アミラーゼ遺伝子(amy)をコードする3.4kbのDNA断片をショットガン法によりクローニングした。さらに、クローン化した遺伝子の制限酵素地図の作成およびサブクローニングを行った。2.耐酸・耐熱性α-アミラーゼ遺伝子の大量発現amy遺伝子を、3種類の発現ベクターpUC19、pET22-b、pNU211と連結し、大腸菌および、Bacillus属細菌での大量発現を試みた。pET22-bに連結されたamy遺伝子は、大腸菌体内で元菌の約24倍のα-アミラーゼを発現した。3.耐酸・耐熱性アミラーゼ遺伝子のDNA塩基配列決定amy遺伝子の全DNA塩基配列を決定した。種々の細菌α-アミラーゼの塩基配列と相同性を有するORFは、既知の3菌株のB.licheniformis由来のα-アミラーゼと同様に483残基のアミノ酸および、29残基のシグナルペプチドをコードしていた。他の各々のB.licheniformis起源のα-アミラーゼとの塩基配列およびアミノ酸配列とのホモロジーは約99%であった。4.耐酸・耐熱性アミラーゼ遺伝子への部位特異的突然変異の導入非耐酸性α-アミラーゼとアミノ酸配列の異なる領域に着目し、amy遺伝子に、オリゴヌクレオチドを使用して部位特異的突然変異を導入した。得られた変異amy遺伝子の遺伝子産物(変異酵素)の耐酸・耐熱性について現在検討中である。

Bacillus licheniformis alpha に origin す る acid resistance, heat resistance of alpha ア ミ ラ ー ゼ posthumous son 伝 の structure お よ び 発 now に masato even し た の under research を た. 1. The acid, heat resistant alpha ア ミ ラ ー ゼ heritage 伝 son の ク ロ ー ニ ン グ B.l icheniformis alpha の ゲ ノ ム DNA よ り, acid, heat resistant alpha ア ミ ラ ー ゼ heritage 伝 child (Amy) を コ ー ド す る 3.4 KB の DNA fragment を シ ョ ッ ト ガ ン method に よ り ク ロ ー ニ ン グ し た. さ ら に, ク ロ ー ン change し た legacy limitations 伝 son の enzymes to 図 の made お よ び サ ブ ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. 2. Acid, heat resistant alpha ア ミ ラ ー ゼ posthumous son 伝 の large 発 now Amy heritage 伝 を, 3 species の 発 now ベ ク タ ー pUC19, pET22 - b, pNU211 と link し, coliform お よ び bacteria, Bacillus genus で の large 発 を now try み た. pET22-bに is linked to されたamy 's remains 伝 <s:1>, and the で probiotics <s:1> in escherichia coli are approximately 24 times more <s:1> α-ア ラ ラ ゼを ゼを and た た are present. 3. Acid and heat resistance: ア, ラ, ゼ, ゼ. DNA base coordination of 伝 seed DNA determines amy. The full DNA base coordination of 伝 seed DNA を determines た. Kind of 々 の bacteria alpha ア ミ ラ ー ゼ の salt base with column と identity を have す る ORF は, 3 strains of both know の の B.l icheniformis origin の alpha ア ミ ラ ー ゼ と with others に 483 residues の ア ミ ノ acid お よ び, 29 residues の シ グ ナ ル ペ プ チ ド を コ ー ド し て い た. He の each 々 の B.l icheniformis origin の alpha ア ミ ラ ー ゼ と の salt base with column お よ び ア ミ ノ acid with column と の ホ モ ロ ジ ー は about 99% で あ っ た. 4. Acid, heat resistant ア ミ ラ ー ゼ posthumous son 伝 へ の site specific sudden variations of different の import non acid alpha ア ミ ラ ー ゼ と ア ミ ノ acid with column の different な に る field mesh し, Amy heritage 伝 に, オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を use し て site specific sudden variations of different を import し た. The られた mutant amy 伝 seed 伝 seed product (mutant enzyme) <s:1> acid and heat resistance に である て て て is currently being discussed at 検 である.