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クロレラ蛋白質のRNA触媒活性化機構の解明

阐明小球藻蛋白的RNA催化激活机制

基本信息

批准号：
07760095
负责人：
会見忠則
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Hiroshima City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760095/
关键词：
クロレラ RNA酵素蛋白質イントロン

项目摘要

本研究は、RNA酵素の触媒活性を細胞内で補助する蛋白質分子を見い出し、それらの相互作用に関する研究手法を開発することを目的に以下の様な研究を行った。1.特異的RNA結合性蛋白質検出法の検討を行った。Chlorellaellipsoideaを液体窒素中で破砕し蛋白質を抽出し、種々の濃度でニトロセルロースフィルターに固定した。これを、ジゴキシゲニン(Dig)ラベルしたC.ellipsoideaのrRNA遺伝子中より見い出したグループ|イントロンRNAと26℃でハイブリダイゼーションさせ、抗Dig抗体で検出した。ネガティブコントロールとして子牛血清アルブミン(BSA)を用いた。その結果、抽出した蛋白質試料とBSAとの間には、優位なシグナル強度の差は認められなかったことより、C.ellipsoideaの細胞内に存在するグループ|イントロンRNAに特異的結合蛋白質の量は、極めて微量でありcrude extractの状態では、検出不可能であると結論付けた。2.次に、特異的RNA結合性蛋白質の精製について検討した。C.ellipsoideaより抽出した蛋白質を硫安沈殿で濃縮い、透析した後、担体としてDEAE-トヨパールを用いたイオン交換クロマトグラフィーによる粗精製を行った。この蛋白質試料を濃縮し、1と同様の方法によりハイブリダイゼーションを行った。しかしながら、ここでも優位なシグナル強度の差は検出できなかった。以上の結果は、一回のクロマトグラフィーによる粗精製ではRNA結合性蛋白質の濃縮が不十分であり、十分なシグナル強度を示すに至らなかったと思われる。今後は、蛋白質の処理量を増やし、アフィニティークロマトグラフィーによる精製を検討する必要があると思われる。また、遺伝子レベルでの解析も検討する必要があると思われる。

In this study, the activity of RNA enzyme catalyst, intracellular enzyme-assisted protein molecules were isolated, and the interaction between proteins was detected. The purpose of this study is to conduct a further study on the following steps. 1. The specific RNA-binding protein was used in this method. In Chlorellaellipsoidea liquid asphyxiant, the broken protein was extracted from the liquid asphyxia, and the protein was extracted from the liquid asphyxiant. In the case of the C.ellipsoidea rRNA, there is an anti-Dig antibody that can be detected at 26 ℃, and the anti-Dig antibody will be released. Please tell me what to do with your baby bovine serum (BSA). The results showed that the protein was extracted, the BSA protein was extracted, the strength of the protein was different, the strength of the protein was different, the intracellular concentration of the C.ellipsoidea protein was detected, the binding protein of the RNA specific protein was detected, the trace amount of the protein was detected, and it was impossible to extract the crude extract protein. two。 The secondary and special RNA-binding proteins were isolated from each other. C.ellipsoidea extract protein from thioamphenicol. After dialysis, the carrier was treated with DEAE- protein. After dialysis, the carrier was treated with crude protein. The protein content is different, and 1 is the same as the method. The difference between the strength and the strength of each bit is different. The above results show that the crude and refined RNA binding protein is not very strong, and the strength of the protein is not very strong. In the future, the egg whites are required to measure the amount of food, so that you can think about it. I don't know, I don't know.