インターロイキン産生動態による豚のリンパ球機能解析

基于白细胞介素产生动态的猪淋巴细胞功能分析

• 批准号: 07760303
• 负责人: 岩田 祐之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760303/
• 关键词: インターロイキン4; 豚; リンパ球; mRNA発現

本研究は豚リンパ球機能をサイトカインの動態の点から解明することを目的として,特にIL-4産生動態を中心に解析した。1.豚インターロイキン4(IL-4)の活性測定PHA刺激豚脾臓リンパ球の培養上清および組み換え型豚IL-4はマウスIL-2およびIL-4依存性細胞株であるHT-2細胞の増殖を促進しなかった。また,ポリクローナル抗ヒトIL-4抗体は豚IL-4と反応せず,IL-4の種特異性が明らかとなった。しかしながら,豚IL-4は単独で豚脾臓リンパ球の増殖を濃度依存性に増殖させ,さらにPHA刺激によるリンパ球増殖反応を濃度依存性に抑制することから,豚リンパ球を用いたIL-4生物活性測定あるいはIL-4依存性細胞株の樹立の可能性が示唆された。2.豚IL-4産生動態の解析豚脾臓リンパ球をPHA10μg/mlで2,12,24,48時間刺激し,これからmRNAを分離し,RT-PCR法によりそのmRNA発現について推定した。その結果,IL-4に対するRT-PCR産生物には予想される約450bpsにバンドが観察され,Southern分析により豚IL-4cDNAであることが確認された。経時的に採取した総リンパ球(1 dish当たり)のRT-PCR産物は細胞の増殖に伴い,48時間後まで漸増した。また,細胞当たりのmRNA量は2時間の刺激では,2時間では全くみられないか,痕跡程度であったが,12時間でほぼピークとなり,以降やや減少傾向がみられたが継続して観察された。一方,IL-2でも12時間でほぼピークとなり,以降変化はなかった。また,培養期間中継続して刺激した場合,24時間でほぼピークとなった。以上のことから,in vitroにおける豚IL-4mRNAの発現はIL-2とほぼ同時に認められ,PHA刺激後12時間でほぼピークに達することが明らかとなった。

The purpose of this study is to analyze the dynamics of IL-4 production. 1. Determination of IL-4 activity in PHA-stimulated mouse spleen cells and culture supernatant of IL-4-dependent HT-2 cells. IL-4 antibody is anti-IL-4 antibody, and IL-4 species specificity is obvious. IL-4 was independently concentration-dependent on the proliferation of IL-4, and concentration-dependent inhibition of IL-4 in response to PHA stimulation. IL-4 biological activity assay was used to demonstrate the possibility of establishing IL-4-dependent cell lines. 2. Analysis of IL-4 production dynamics by PHA10μg/ml at 2, 12, 24, 48 time intervals As a result,IL-4 mRNA was detected at approximately 450bps by RT-PCR and confirmed by Southern analysis. The RT-PCR products were detected at 1 dish and gradually increased after 48 hours. When the mRNA level of the cell is 2 times higher than that of the stimulus, 2 times higher than that of the trace, and 12 times higher than that of the stimulus, the mRNA level of the cell decreases. One side,IL-2 12 time During the incubation period, the medium temperature is stimulated, and the medium temperature is stimulated for 24 hours. IL-4mRNA expression was detected in vitro at 12 hours after PHA stimulation.