dsRNAレオウイルスの複製機構の解明から創薬開発への基盤研究

本研究ではdsRNAレオウイルスの複製機構を解明し、これを阻害する薬剤を探索して創薬開発の一助とすることを目的とし、オルビウイルス（イバラキウイルス、IBAV）をモデルとして、2022年度は以下の研究を実施した。① エンドサイトーシスによるウイルスの細胞侵入機構：エンドサイトーシス の３経路（マクロピノサイトーシス、カベオラ介在性、クラスリン介在性）のインヒビターを用いてウイルスの取り込み増殖量について確認実験を行ったところ、オルビウイルスはマクロピノサイトーシスによって細胞内に侵入することが確定した。② ウイルス複製におけるオートファジー解析：アミノ酸不含培地は可逆的にmTORC活性を抑制するが、ウイルス増殖を促進した。一方、mTORC阻害剤であるTorin1及びRapamycinはウイルスを増殖させなかった。また、これまで他のオルビウイルスで報告のあるオートファジー経路を利用した増殖については確認されなかった。③ウイルス感染細胞におけるアポトーシス：ウイルス感染細胞におけるアポトーシス誘導及びアポトーシス経路を利用したウイルス増幅について検討したが、弱いアポトーシス活性を示したが、ウイルス増殖に影響を及ぼすものではなかった。④エンドソームの酸性化の影響：エンドソームの酸性化を阻害するバフィロマイシンA1を用いて、ウイルス増殖が抑制されるかどうか検討したところ、ウイルス複製は抑制された。また、ウイルス溶液を酸性にするとウイルス構造蛋白であるVP2と VP5が除去されたが、バフィロマイシンA1を添加してもウイルス増殖は抑制されなかったことから、エンドソーム内の酸性化がウイルス複製に重要であることが確認された。

本研究ではdsRNAレオウイルスの複製機構を解明し、これを阻害する薬剤を探索して創薬開発の一助とすることを目的とし、オルビウイルス（イバラキウイルス、IBAV）をモデルとして、2022年度は以下の研究を実施した。① エンドサイトーシスによるウイルスの細胞侵入機構：エンドサイトーシス の３経路（マクロピノサイトーシス、カベオラ介在性、クラスリン介在性）のインヒビターを用いてウイルスの取り込み増殖量について確認実験を行ったところ、オルビウイルスはマクロピノサイトーシスによって細胞内に侵入することが確定した。② ウイルス複製におけるオートファジー解析：アミノ酸不含培地は可逆的にmTORC活性を抑制するが、ウイルス増殖を促進した。一方、mTORC阻害剤であるTorin1及びRapamycinはウイルスを増殖させなかった。また、これまで他のオルビウイルスで報告のあるオートファジー経路を利用した増殖については確認されなかった。③ウイルス感染細胞におけるアポトーシス：ウイルス感染細胞におけるアポトーシス誘導及びアポトーシス経路を利用したウイルス増幅について検討したが、弱いアポトーシス活性を示したが、ウイルス増殖に影響を及ぼすものではなかった。④エンドソームの酸性化の影響：エンドソームの酸性化を阻害するバフィロマイシンA1を用いて、ウイルス増殖が抑制されるかどうか検討したところ、ウイルス複製は抑制された。また、ウイルス溶液を酸性にするとウイルス構造蛋白であるVP2と VP5が除去されたが、バフィロマイシンA1を添加してもウイルス増殖は抑制されなかったことから、エンドソーム内の酸性化がウイルス複製に重要であることが確認された。