標識したcDNAの導入による筋原線維形成機構の解析に関する形態学的研究

引入标记cDNA分析肌原纤维形成机制的形态学研究

• 批准号: 07770005
• 负责人: 小宮山 政敏
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770005/
• 关键词: 筋原線維; ミオシンアルカリ軽鎖; アイソフォーム; エピトープタグ; 螢光抗体法; 共焦点レーザー顕微鏡; キメラ

ミオシンアルカリ軽鎖(LC)には、速筋型(1fと3f)、遅筋型(1sa)、遅筋/心室筋型(1sb)、非筋型(3nm)など多数のアイソフォームが存在し、それらの発現が筋細胞の発生過程にしたがって変化することが知られている。本研究では、同一細胞内に複数のアイソフォームが存在した場合、それらの筋原線維への組み込まれ易さに違いがあるのかどうかを調べるために、新生ラットおよび成熟ラットの培養心室筋細胞においてこれらのcDNAを2種類ずつ発現させ、アイソフォーム毎の筋原線維への局在化傾向の違いを同一細胞内で直接比較した。導入するcDNAに予め異なるエピトープタグを組み込んでおくことにより、発現したアイソフォームをそれらタグに対する抗体で識別し、LCアイソフォームの分布を共焦点レーザー顕微鏡で観察した。その結果、筋原線維への局在化傾向は3nm、1sa、1sb、1f、3fの順に強くなることが明らかになった。筋細胞の発生過程におけるLCアイソフォーム変換の順序は、この局在化傾向の強まる順序に類似している。これらのことから、アイソフォームの移行期においては後から発現したアイソフォームが優先的に筋原線維に組み込まれ、その変換が速やかに行われることが考えられた。次に、蛋白質のどの部分(アミノ酸配列)がアイソフォーム特有の局在化傾向に関与しているのかを調べるために、アイソフォームどうしで一部を交換したキメラcDNAを作製し、上記と同様の実験を行った。その結果、タイプ3のLC(3f、3nm)ではN端半分、タイプ1のLC(1f、1sa、1sb)ではそれに対応する中央部の約70個のアミノ酸が筋原線維への局在化傾向の違いに重要であることが明らかになった。今後この部位をさらに詳しく解析し、LCの局在に重要なアミノ酸配列を決定して行きたい。

MIオシンアルカリ軽 lock (LC)には, quick rib type (1fと3f), split rib type (1sa), split rib/ventricular rib type (1sb), non-strand type (3 nm)など多のアイソフォームがexistentし、それらの発appearがThe process of muscle cell growth is known as the transformation process. In this study, there are cases where multiple のアイソフォームが exists in the same cell, and それらのsujihara Line dimension へのgroup み込まれeasy さにviolation いがあるのかどうかを动べるために、新ラットおよび Mature ラットの Cultured ventricular muscle cells においてこれらのcDNA を 2 types ずつ発成させ、アイソフォームのsujihara line dimension へのlocalization tendency のviolation いをdirect comparison within the same cell した. Import するcDNAに于めisoなるエピトープタグをgroup み込んでおくことにより、発成したアイソフォームをそれらタグに対するAntibody recognitionし、LCアイソフォームのdistributionをConfocalレーザー顕Microscope inspectionした.そのRESULTS, NUSIGARA line dimension へのlocalization tendency は3nm, 1sa, 1sb, 1f, 3f のcisに强くなることが明らかになった. The process of tendon cell growth is similar to the sequence of LC and LC and the order of change and localization tendency.これらのことから, アイソフォームの transition period においては后から発appears したアイソフォーThe priority is given to にsujihara line dimension にgroup み込まれ, その変change がspeed やかに行 われることが卡えられた. Second, the protein part (アミノacid arrangement) is the unique localization tendency and the adjustment of the しているのかをるために, アイソフォームどうしで一一を Exchange したキメラcDNAを产し, 上记と同様の実験を行った.その results, タイプ3のLC(3f, 3nm)ではN-terminal half point, タイプ1のLC(1f, 1sa, 1sb)ではそれThere are about 70 に対応するcentral parts of the acid がsugihara line dimension へのbureau in the trend of violative いにimportant であることが明らかになった. From now on, it is important to analyze the detailed analysis of the parts and the acid composition of the LC, and then decide what to do.