血管内皮細胞のカルシウム依存性塩素電流の活性化機序と細胞内情報伝達に関する研究

血管内皮细胞钙依赖性氯电流激活机制及细胞内信号传递研究

• 批准号: 07770038
• 负责人: 渡邉 マキノ
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770038/
• 关键词: 血管内皮細胞; 塩素電流; 細胞内カルシウム濃度; パッチクランプ法; 蛍光顕微測光法

血管内皮細胞において、細胞内Ca^<2+> ([Ca^<2+>a]i)によって塩素電流が誘発される。このCa^<2+>依存性塩素電流の活性化に関わる細胞内情報伝達をパッチクランプ法により検討した。また、膜電位による細胞内Ca^<2+>濃度の調節をパッチクランプ法を併用した蛍光顕微測光法にて検討した。1. Ca^<2+>依存性塩素電流の活性化機序と細胞内情報伝達(1)Ca^<2+>依存性塩素電流はCa^<2+>誘発性K^+電流に遅れて発生した。(2) [Ca^<2+>a]iおよび細胞内ATP濃度に依存して増大した。(3)細胞内にATPの代りにATPのアナログであるATP_γS、AMP-PNPを適用したところ、ATP_γSではATP適用時以上に電流が増大したのに対し、AMP-PNPでは電流の増大はごく僅かであった。(4)カルモジュリン(CaM)拮抗剤であるトリフルオペラジンおよびW-7によって可逆的に抑制された。さらに、カルモジュリンキナーゼII(CaMKII)阻害剤であるKN-93によっても可逆的に抑制された。2.膜電位による[Ca^<2+>]iの調節(1)灌流液に高K^+溶液および低Cl^-溶液を用いると膜電位は脱分離し、[Ca^<2+>]iは減少した。(2)灌流液にNa^+除去液を適用すると膜電位は過分極し、[Ca^<2+>]iは上昇した。以上の結果より、Ca^<2+>依存性塩素電流の活性化には、Ca-CaM複合体を介したCaMKIIのリン酸化が関与していることが示唆された。また、[Ca^<2+>]iは、膜の過分極で上昇し、脱分極で減少することが明らかになった。今後は、生理的アゴニスト存在下における膜電位と[Ca^<2+>]iの関係、さらに細胞内情報伝達系のK^+電流、カチオン電流による修飾について検討を進めたい。

Endothelial cells are stimulated by intracellular Ca^<2+> ([Ca^<2+>a]i) and induced by serotonin currents. The activation of Ca^<2+>-dependent hormone currents is related to intracellular information transmission. The regulation of intracellular Ca^<2+> concentration by membrane potential was investigated by using fluorescence microscopy. 1. Ca^<2+>-dependent hormone current activation mechanism and intracellular information transmission (1)Ca^<2+>-dependent hormone current Ca^<2 +>-induced K^+ current generation. (2)[Ca^<2+>a]i increases depending on intracellular ATP concentration. (3)ATP and AMP-PNP in the intracellular ATP system increase when ATP and AMP-PNP are applied. (4)The CaM antagonist is a reversible inhibitor of W-7. KN-93 is a reversible inhibitor of KN-93. 2. The membrane potential is regulated by [Ca^<2+>]i.(1) The membrane potential is deregulated by high K^+ solution and low Cl^-solution in perfusate.[Ca^<2+>]i is decreased. (2)Perfusion solution Na^+ removal solution is suitable for membrane potential to increase,[Ca^+>]i These results indicate that activation of Ca^<2+>-dependent chlorophyll currents and Ca-CaM complexes are involved in CaMKII acidification. [Ca^<2+>]i, membrane polarization increases, depolarization decreases. In the future, the relationship between membrane potential and [Ca^<2+>]i will be discussed in the presence of physiological factors, and the K^+ current and K^+ current of intracellular information system will be discussed in the future.

项目成果

柚本和彦: "細胞内カルシウム研究プロトコール" 羊土社, (印刷中

Kazuhiko Yuzumoto：“细胞内钙研究方案”Yodosha，（正在出版）

R. Ochi: "Regulation of calcium signalling by K^+ and Cl^- currents in endotherial cells." Heart and Vessel. suppl. 9. 80-82 (1995)

R. Ochi：“内皮细胞中 K^ 和 Cl^- 电流对钙信号传导的调节。”