肝細胞の増殖と細胞死の加齢変化および食餌制限の影響に関する細胞生物学的研究

关于肝细胞增殖和细胞死亡的年龄相关变化以及饮食限制影响的细胞生物学研究

• 批准号: 07770155
• 负责人: 樋上 賀一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770155/
• 关键词: 老化; 職餌制限; 細胞増殖; 細胞死; サイクロヘキシミド; PCNA; TUNEL; 肝細胞

1.in vivo肝細胞の増殖と細胞死における加齢変化とDRによる影響ad libitum(AL)およびdietary restriction(DR)feedingされた3,6,15,24カ月齢の雄F344ラットから摘出した肝臓の4%パラホルム固定、パラフィン包埋切片において,proliferating cell nuclear antigen(PCNA)に対する免疫細胞化学、in vivoでDNA fragmentationを検出できるterminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP-biotin nick endolabeling(TUNEL)を使用し,肝細胞の細胞増殖および細胞死の頻度を計測した.ALラット肝細胞のPCNA強陽性細胞率は加齢に伴い減少したが,DRラット肝細胞のPCNA強陽性細胞率は3から24カ月齢を通し低値を示し加齢変化を示さなかった.そして24カ月齢では逆にDRラットの強陽性細胞率がALラットに比し高い値を示した.またTUNEL陽性率は6カ月齢で低値を示し,その後加齢に伴い増加したが,AL,DR両群間に有意な差は認められなかった.すなわち加齢に伴い肝細胞の増殖能は低下するが,DRはこの低下を抑制する.また肝細胞死は加齢に伴い増加するが,DRは細胞死に強い影響を与えないと考えられた.2.in vivo肝細胞の細胞死誘導能の加齢変化とDRによる影響cycloheximide(CHX)の静注によりin vivo肝細胞に細胞死が誘導されると報告されている.そこでTUNELによりALおよびDR feedingされた6,24カ月齢の雄F344ラット肝細胞の細胞死誘導率の経時変化を検討した,6カ月齢ALおよびDRラット,24カ月齢DRラット肝細胞のTUNEL陽性率は経時的に増加し,2.5時間後にプラトーに達したが,24カ月齢ALラット肝細胞のTUNEL陽性率は経時的に増加し2.5時間後にもプラトーに達せず,4時間後まで有意に増加を示した.すなわち肝細胞のCHXに対する細胞死感受性が加齢に伴い増加しており,DRによりこの加齢に伴う感受性の増加が抑制された.またCHXにより誘導される肝細胞の細胞死の過程に関与していると思われるc-myc mRNAの発現レベルの定量化およびin situ hybridizationは現在進行中である.

1.in Vivo Liver Cell Proliferation and Cell Death Increased by DR Effects ad libitum(AL) and dietary restriction(DR)feeding 3,6,15,24 months ago Liver F344 extract 4% fixed,proliferating cell nuclear antigen(PCNA) for immunocytochemistry In vivo DNA fragmentation was detected using terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated DTP-biotin nick endolabeling(TUNEL), and the proliferation and death frequency of hepatocytes were measured. The percentage of PCNA strongly positive cells in DR hepatocytes decreased from 3 to 24 months. The percentage of strongly positive cells in the reverse DR was higher than that in the middle of 24 months. Moreover, the TUNEL positive rate has been at a low level since 6 months ago, but it has increased with the increase in time. There is an intentional difference between the AL and DR groups. In addition, the proliferation of liver cells is inhibited by DR. 2. Increase in the induction of hepatocyte cell death in vivo and the effect of DR on cycloheximide(CHX) induced by intravenous injection in vivo. The TUNEL positive rate of F344 hepatocytes increased from 6 to 24 months, and reached 2.5 to 24 months later. 4. Intentional increase after time. The susceptibility of liver cells to CHX increases with the increase of DR and increases with the inhibition of DR. CHX is involved in the induction and quantification of c-myc mRNA expression and in situ hybridization.